人顆粒酶B ELISA 檢測試劑盒說明書

貨號：HG-GB001

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）法，將人顆粒酶B標(biāo)準品和待測樣本加入預(yù)包被抗人顆粒酶B抗體的酶標(biāo)板，然后加入稀釋后的生物i素標(biāo)記的人顆粒酶B檢測抗體，最后加入 Streptavidin-HRP，形成抗體+抗原+抗體‐Biotin+ SA‐HRP 復(fù)合物，洗板后加入 TMB 顯色液顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下由無色轉(zhuǎn)化成藍色并在終止液的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測到的人顆粒酶B的量呈正相關(guān)。
檢測范圍： 6.86~5000 pg/mL
靈敏度：1.12 pg/mL

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于生物制品純化工藝過程的優(yōu)化、中間工藝過程的雜質(zhì)控制以及終產(chǎn)品的放行檢測。

試劑盒組成：

備 注:所有組分存儲溫度均為 2~8℃，有效期12個月。

需自行準備的材料

◆酶標(biāo)儀

◆去離子水

◆恒溫培養(yǎng)箱

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

實驗前準備

1.所有試劑以及待測樣本需要恢復(fù)室溫。所有試劑現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1x洗液配制：濃縮洗液平衡至室溫，不要有結(jié)晶?；靹蚝蟾鶕?jù)用量，取適量用超純水按1：9的比例，將10x洗液稀釋10倍，最終得到1x洗液。

3.標(biāo)準品的配制:

●?血清和血漿樣本，使用即用型標(biāo)準品S0~S7。
●?其他類型樣本，使用高濃度標(biāo)準品S（50000pg/mL）進行梯度稀釋。準備8個1.5mL離心管，按照標(biāo)準品濃度依次標(biāo)記。取30μL標(biāo)準品S+270μL SPB(即樣品基質(zhì),如培養(yǎng)基、稀釋液、自制buffer等) ，所得溶液濃度為5000pg/mL。每個離心管中加入200μL SPB，將5000pg/mL的高濃度標(biāo)準品按1：2進行梯度稀釋。SPB用作零標(biāo)準（0pg/mL）。

操作步驟

使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復(fù)室溫。建議所有的標(biāo)準品和待檢樣本進行雙復(fù)孔測定。

1. 試劑準備：提前準備好各種待測試劑、稀釋好的標(biāo)準品和待測樣本。
2. 酶標(biāo)板條確定：計算待測樣本和標(biāo)準品所需酶標(biāo)板條，將酶標(biāo)條從鋁箔袋取出，剩余的酶標(biāo)條放回鋁箔袋中并封好袋口，低溫保存。
3. 每孔加入50μL檢測緩沖液。
4. 樣本及檢測抗體孵育：加入標(biāo)準品和待測樣本，50 μL/孔，確保 15 min 內(nèi)完成點樣。再向每孔加入50 μL 檢測抗體。用封板膜封板，置于恒溫孵育器，500轉(zhuǎn)/分鐘、25℃孵育1小時。
5. 洗板：棄去孔中液體，加入 1×洗液（300 μL/孔）洗板4次，拍干酶標(biāo)板中殘留液體。

6. 酶結(jié)合物孵育：將酶結(jié)合物加入酶標(biāo)板中，100 μL/孔，用封板膜封板，置于恒溫孵育器，500轉(zhuǎn)/分鐘、25℃孵育30分鐘。
7. 洗板：同步驟5。
8. 顯色：每孔加入 100 μl 顯色底物 TMB，室溫孵育15~20 分鐘。
9. 終止：每孔加入 100 μL終止液，輕輕震動酶標(biāo)板至顯色均勻。
10. 讀值：20 min 內(nèi)讀取 450nm/630nm 波長處的吸光度值。450nm 作為檢測波長，630nm 作為參比波長。

結(jié)果處理

1. 標(biāo)準曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實際測定為準）

2. 標(biāo)準品理論濃度與對應(yīng) OD 值以四參數(shù)進行擬合，得到標(biāo)準曲線(如下圖所示)。

注意事項

1.樣品首i次檢測，建議進行至少3個連續(xù)倍數(shù)的稀釋，以在標(biāo)曲范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個稀釋后樣品。

2.試劑按標(biāo)簽說明儲存，使用前室溫平衡。

3.包被酶標(biāo)板使用前請平衡至室溫再打開外包裝袋，實驗中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個月。其他不用的試劑應(yīng)包裝好或蓋好。

4.實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

5.使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑的稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)嶒灲Y(jié)果尤為重要。

6.洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾放入反應(yīng)孔中吸水。

7.底物顯色液對光敏感，避免長時間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果。

8.本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請在效期內(nèi)使用。

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