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基因敲除原理 我们是利用CRISPR/Cas9基因敲除系统，CRISPR是一种来源于细菌免疫系统的基因编辑技术，能精确识别靶细胞DNA片段中靶点的核苷酸序列，利用核酸内切酶蛋白对DNA靶点序列进行切割，产生双链DNA断裂，断裂将在体内被细胞修复机制修复，其中，非同源末端连接NHEJ这种修复将产生短的核酸插入或删除，其带来的基因移码突变，将导致提前出现终止密码子，从而完成对靶细胞DNA目的基因片段的敲除。在PAM片段上游设计sgRNA后，通过构建基因敲除载体，结合慢病毒系统，可以实现外源基因的整合，利用抗生素或荧光，最终筛选出成功实现基因敲除的细胞。 CRISPR/Cas9基因敲除系统服务优势： （1）广泛适用于哺乳动物细胞，脱靶率更低 （2）提高转染率，减低细胞毒性，缩短实验周期 基因敲除细胞株的项目流程： （1）项目评估（免费） （2）细胞抗生素敏感浓度摸索与单克隆形成验证 （3）sgRNA设计与敲除载体构建 （4）慢病毒包装与转染 （5）阳性多克隆筛选 （6）阳性单克隆筛选 （7）敲除验证 基因敲除服务周期：根据细胞生长特性与基因不同，服务周期在5～10周不等。 服务流程：                      客户提供：靶细胞及其培养方案、基因名称 交付标准：1×基因敲除阳性单克隆细胞株（复苏）                   1×项目结题报告 服务保证： （1）项目启动后，密切跟进实验进展，每两周进行一次项目进度汇报。 （2）项目结题报告包含sgRNA序列、实验详细记录、测序结果及分析等，满足客户后期论证材料需求。 （3）基因敲除阳性单克隆均经过靶标片段T载体克隆测序验证，保证基因敲除。
运输方式：常温运输/干冰运输 用途限制：仅供科研
细胞接收后处理： 收到细胞后，及时核对培养瓶/冻存管上标注的细胞名称是否正确，以及培养瓶是否有破损或漏液等异常情况。如发现问题请及时与销售联系。 收到常温运输的细胞培养瓶后，请在显微镜下仔细观察细胞生长状态，并拍照留证（为细胞售后提供依据）。将培养瓶放置于37℃培养箱中静置培养，待细胞融合度为70%~80%状态再进行细胞处理。（注：运输过程易导致部分细胞脱落，漂浮，属正常现象，放置培养箱中静置培养，可使其贴壁；另。请使用新鲜培养基和新的T53培养瓶进行细胞传代，不要使用原培养瓶中的培养基。 收到冻存细胞应立即复苏或放置液氮罐中。 收到复苏好后的细胞一周内，如若发现细胞状态不佳或细胞污染，请及时与销售联系，并提供该细胞详细的实验操作说明和每天细胞状态的图片记录（填写【细胞售后反馈表】），经由我司技术人员核实，若确认细胞本身存在问题，由我司重新复苏细胞并补发。