微量凯氏定氮法
在乳制品中的应用
凯氮应用
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简介
本文介绍了一种测定乳制品总蛋白质含量的简便可靠的方法，按照“微氮"方法进行样品消化，显著减少了化学试剂和消耗品的使用，从而带来了生态和经济上的双重优势。使用全自动凯氏定氮仪 K-375 和进样器 K-376 / K-377 按照标准进行蒸汽蒸馏，随后进行电位滴定法进行滴定。
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设备
尾气吸收仪 K-415（114152331）
消解仪 K-449 （1154492000）
凯氏定氮仪 K-375/K-377（113751720）
样品管 300 mL（037377）
分析天平（精度±0.1 mg）
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化学品与材料
化学品：
浓度 98% 的硫酸，默克公司（1007482500）
凯氏定氮片（11057980）
32% NaOH
2% 硼酸，pH 值调至 4.65
硫酸 0.01mol/L
为确保安全操作，请注意所有相关的材料安全数据表（MSDS）！
标准样品：
蛋白质含量标为每 3.7g/100g 酸奶
蛋白质含量标注为每 9.7g/100g 夸克奶酪
标签上标明蛋白质含量为 32g/100g 帕尔马干酪
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实验流程
4.1 消化方法 - 样品
按照 表1 中的说明，将每个样本放入 300mL 的样品管中。
加入 2 片催化片和 8mL 浓度为 96% 的硫酸。
准备额外的空白和化学试剂，不包含样品。
连接 K-415 与 K-449，以吸收消化过程中产生的酸性烟雾。
按照 表1 中所列参数启动消解程序。
加热步骤 | 温度 [摄氏度] | 时间 [分钟] |
预热 | 350 | - |
1 | 420 | 120 |
冷却 | - | 30 |
4.2 蒸馏与滴定
按照 表2 中所列参数蒸馏样品。
表2： K-375/K-376 蒸馏和滴定的参数
4.3 计算
结果以氮的百分比计算得出。为了计算样品中的蛋白质含量，需将氮含量乘以特定样品的蛋白质系数。以下公式（1）、（2）和（3）用于计算结果。
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结果
5.1 色氨酸的回收率
表3 列出了色氨酸分析（含量＞99%）的氮测定结果及回收率。色氨酸的理论氮含量为 13.72%?；厥章试?8% - 102% 的规定范围内。
色氨酸 | mSample [g] | VSample [mL] | % NTry | 回收率 [%] |
示例 1 | 0.0283 | 14.220 | 13.53 | 98.65 |
示例 2 | 0.0302 | 15.289 | 13.67 | 99.67 |
平均值 [%] | - | - | 13.60 | 99.16 |
相对标准偏差（%） | - | - | 0.73 | 0.73 |
空白体积的平均值 (VBlank) 为 0.3985 mL（n = 2）。
5.1 乳制品中蛋白质的测定
乳制品中氮和蛋白质含量的测定结果见 表4 至 表6。
表4：酸奶中氮和蛋白质含量测定结果（标示蛋白质含量为 3.7g/100g）。
酸奶 | mSample [g] | VSample [mL] | % N | 百分比 P |
示例 1 | 0.258 | 6.821 | 0.68 | 4.34 |
示例 2 | 0.2545 | 6.306 | 0.63 | 4.04 |
示例 2 | 0.2702 | 6.591 | 0.63 | 4.00 |
平均值 [%] | - | - | 0.65 | 4.13 |
相对标准偏差（%） | - | - | 4.58 | 4.58 |
空白体积的平均值 (VBlank) 为 0.381 毫升（n = 2）。
表 5：夸克奶酪（标示蛋白质含量 9.7g/100g）中氮和蛋白质的含量。
夸克奶酪 | mSample [g] | VSample [mL] | % N | 百分比 P |
示例 1 | 0.1591 | 10.216 | 1.70 | 10.86 |
示例 2 | 0.179 | 10.94 | 1.63 | 10.37 |
示例 2 | 0.1444 | 9.019 | 1.64 | 10.48 |
平均值 [%] | - | - | 1.66 | 10.57 |
相对标准偏差（%） | - | - | 2.40 | 2.40 |
表6： 帕尔马干酪中氮和蛋白质含量测定结果（标示蛋白质含量 32g/100g）
帕尔马干酪 | mSample [g] | VSample [mL] | % N | 百分比 P |
示例 1 | 0.1261 | 22.684 | 4.92 | 31.37 |
示例 2 | 0.1168 | 20.877 | 4.88 | 31.10 |
示例 2 | 0.1411 | 25.052 | 4.86 | 31.03 |
平均值 [%] | - | - | 4.89 | 31.17 |
相对标准偏差（%） | - | - | 0.57 | 0.57 |
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结论
使用消解仪 K-449 和全自动凯氏定氮仪 K-375 / K-376 通过电位滴定法测定乳制品中的氮和蛋白质， 可获得可靠且重现性好的结果，相对标准偏差低（RSD）。微量凯氏定氮法减少了消解过程中硫酸和催化剂的用量，也减少了蒸馏步骤中 NaOH 的用量?；约劣昧康慕谑∥淇隙ǖù戳司煤蜕矫娴乃赜攀?，同时又保持了其高精度和高准确度。
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