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九、RT-PCR

RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在*條件下進行。

實驗步驟：

1、RNA的提??；

2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA；

3、PCR擴增；

4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。

十、實時熒光定量PCR（Q—PCR）（Real-time Quantitative PCR ）

利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增產(chǎn)物量的變化，通過Ct值和標準曲線的關(guān)系對起始模板進行定量分析。

閾值：是循環(huán)開始3～15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍，設定在擴增曲線指數(shù)增長期。

C(t)值：熒光信號（擴增產(chǎn)物）到達閾值時所經(jīng)過的擴增循環(huán)次數(shù)。