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使用蛋白 A/G 磁珠進(jìn)行抗體純化的步驟與技巧

閱讀：628      發(fā)布時間：2024-11-4
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 　　蛋白 A/G 磁珠是一種常用的抗體純化工具，其通過特異性結(jié)合抗體的Fc段，實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)抗體的高效富集和純化。
 
　　一、準(zhǔn)備工作
　　材料準(zhǔn)備
　　蛋白 A/G 磁珠
　　待純化的抗體樣品
　　緩沖液
　　磁力架
　　離心管
　　磁珠預(yù)處理
　　根據(jù)磁珠的使用說明，進(jìn)行必要的預(yù)處理。
 
　　二、純化步驟
　　抗體樣品準(zhǔn)備
　　將待純化的抗體樣品置于合適的離心管中。
 
　　磁珠結(jié)合
　　將適量的蛋白 A/G 磁珠加入抗體樣品中，輕輕混勻。
　　在室溫下緩慢旋轉(zhuǎn)或振蕩一定時間，使抗體與磁珠充分結(jié)合。
 
　　磁分離
　　將離心管放置在磁力架上，靜置一段時間，使磁珠聚集在磁場邊緣。
　　去除上清液，保留磁珠與抗體的復(fù)合物。
 
　　洗滌
　　加入適量的洗滌緩沖液，輕輕混勻后再次進(jìn)行磁分離。
　　重復(fù)洗滌步驟數(shù)次，以去除未結(jié)合的雜質(zhì)。
 
　　抗體洗脫
　　加入適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液（通常為低pH緩沖液），輕輕混勻。
　　室溫下靜置一段時間后，再次進(jìn)行磁分離。
　　收集上清液，即為純化的抗體。
 
　　三、技巧與注意事項
　　控制結(jié)合時間
　　結(jié)合時間過短可能導(dǎo)致抗體結(jié)合不全，過長則可能影響抗體活性。需根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。
 
　　選擇合適的緩沖液
　　不同的抗體可能對緩沖液的要求不同，需根據(jù)抗體的性質(zhì)選擇合適的緩沖液。
 
　　洗滌
　　洗滌步驟要完整，以確保去除雜質(zhì)，但也要避免過度洗滌導(dǎo)致抗體損失。
 
　　注意pH值
　　洗脫緩沖液的pH值要適當(dāng)，過低可能導(dǎo)致抗體變性，過高則可能導(dǎo)致洗脫效果不佳。
 
　　避免污染
　　在整個操作過程中，要注意無菌操作，避免交叉污染。

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