PRM技術(shù)如何幫助分析低豐度蛋白質(zhì)？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì組學(xué)研究與臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用中，低豐度dànbáizhì的定量檢測(cè)始終是技術(shù)瓶頸。這類(lèi)蛋白雖然表達(dá)水平極低，卻往往具有jígāo的生物學(xué)意義，例如炎癥因子、細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)錄因子或疾病早期標(biāo)志物。DDA（Data Dependent Acquisition）模式受限于采集深度和動(dòng)態(tài)范圍，難以穩(wěn)定檢測(cè)這些低豐度靶標(biāo)。（Parallel Reaction Monitoring）PRM技術(shù)憑借其高選擇性與靈敏度，為低豐度蛋白的定量分析提供了有效解決方案。本文將深入解析PRM技術(shù)在低豐度蛋白檢測(cè)中的核心優(yōu)勢(shì)、實(shí)現(xiàn)機(jī)制及百泰派克生物科技的技術(shù)平臺(tái)能力。

一、低豐度dànbáizhì分析的挑戰(zhàn)

1、動(dòng)態(tài)范圍極廣：血漿中蛋白濃度可跨越12個(gè)數(shù)量級(jí)，低豐度蛋白信號(hào)極易被高豐度成分掩蓋。

2、信噪比低：目標(biāo)蛋白信號(hào)微弱，在復(fù)雜基質(zhì)背景下易被干擾離子淹沒(méi)。

3、重復(fù)性差：其他蛋白組學(xué)方法在檢測(cè)限附近的定量穩(wěn)定性差，導(dǎo)致跨樣本比較誤差大。

4、缺乏穩(wěn)定內(nèi)標(biāo)：低豐度靶標(biāo)缺乏可靠的參考點(diǎn)，易受儀器波動(dòng)或前處理差異影響。

二、PRM技術(shù)如何應(yīng)對(duì)這些挑戰(zhàn)？

PRM是在高分辨率質(zhì)譜平臺(tái)（如Orbitrap）上運(yùn)行的靶向質(zhì)譜技術(shù)，其特點(diǎn)在于：對(duì)特定母離子進(jìn)行選擇性碎裂，隨后對(duì)其所有碎片離子進(jìn)行全掃描采集，從而在多個(gè)維度上提升低豐度dànbáizhì的檢測(cè)能力。

核心優(yōu)勢(shì)如下：

1、高分辨率消除背景干擾

（1）PRM技術(shù)常用的Orbitrap質(zhì)譜儀可提供>30,000的分辨率，有效區(qū)分質(zhì)荷比相近的干擾離子。

（2）jīngquè質(zhì)量篩選窗口（±5 ppm）大幅提高信噪比，增強(qiáng)低豐度信號(hào)的識(shí)別能力。

2、多碎片離子增強(qiáng)定量特異性

（1）相比SRM只能采集1~2個(gè)transition，PRM可同時(shí)記錄全部碎片離子，后期選擇zuì優(yōu)組合用于定量。

（2）多維確認(rèn)機(jī)制顯著提升低豐度信號(hào)的可信度。

3、自由選擇定量離子，提高重現(xiàn)性

研究者可根據(jù)每次運(yùn)行數(shù)據(jù)，自由選擇zuì佳離子對(duì)進(jìn)行定量，緩解信號(hào)不穩(wěn)問(wèn)題。

4、結(jié)合穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)實(shí)現(xiàn)jīngzhǔn校準(zhǔn)

合成的SIL肽段在質(zhì)譜行為與靶標(biāo)肽段wánquán一致，可有效補(bǔ)償進(jìn)樣波動(dòng)與離子化效率差異。

三、影響PRM技術(shù)檢測(cè)低豐度蛋白效果的關(guān)鍵因素

1、肽段選擇質(zhì)量

（1）優(yōu)選具有良好離子響應(yīng)、wúxiū飾、無(wú)二義性的特征肽段。

（2）可結(jié)合DIA數(shù)據(jù)、數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)工具輔助篩選（如PeptideAtlas、Prosit）。

2、樣本預(yù)處理與富集技術(shù)

采用蛋白脫鹽、SPE固相萃取、免疫富集（如SISCAPA）等方法去除高豐度背景，提升目標(biāo)信號(hào)占比。

3、色譜分離性能優(yōu)化

（1）提高保留時(shí)間穩(wěn)定性，防止目標(biāo)信號(hào)在復(fù)雜洗脫過(guò)程中被掩蓋。

（2）可使用多維色譜或延長(zhǎng)梯度增強(qiáng)分離度。

4、質(zhì)譜采集參數(shù)調(diào)節(jié)

調(diào)整孤立窗口大小、注入時(shí)間（IT）與自動(dòng)增益控制（AGC）設(shè)置，確保低豐度離子充分采集。

四、百泰派克生物科技的PRM技術(shù)平臺(tái)

百泰派克生物科技在低豐度dànbáizhì靶向定量領(lǐng)域積累了豐富的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，構(gòu)建了以下優(yōu)勢(shì)體系：

1、設(shè)備平臺(tái)*：采用Orbitrap Exploris 480等高分辨儀器，提供高靈敏度、高通量的PRM分析能力。

2、方法學(xué)定制開(kāi)發(fā)：根據(jù)客戶(hù)靶標(biāo)特性，個(gè)性化設(shè)計(jì)肽段、優(yōu)化參數(shù)、定制SIL內(nèi)標(biāo)。

3、全流程標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)控：從樣本處理、肽段合成、數(shù)據(jù)分析到項(xiàng)目報(bào)告，均設(shè)有嚴(yán)格質(zhì)量控制節(jié)點(diǎn)。

4、復(fù)雜樣本適配能力：針對(duì)血漿、腦脊液、細(xì)胞裂解液等高背景樣本，提供富集和前處理解決方案。

PRM技術(shù)憑借其高選擇性、高靈敏度和高度定量一致性，正逐步成為低豐度dànbáizhì分析的主流手段。面對(duì)疾病標(biāo)志物驗(yàn)證、藥物靶點(diǎn)研究等場(chǎng)景，PRM為科研人員提供了強(qiáng)有力的數(shù)據(jù)支持。百泰派克生物科技將持續(xù)優(yōu)化PRM平臺(tái)能力，為客戶(hù)提供更jīngzhǔn、更可靠的低豐度蛋白定量服務(wù)。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)*，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專(zhuān)有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶(hù)提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶(hù)提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿(mǎn)足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶(hù)的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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