無(wú)標(biāo)記定量技術(shù)（LFQ）：原理、應(yīng)用與最新進(jìn)展檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

引言：為何越來(lái)越多科研人員選擇LFQ？

在蛋白組學(xué)研究中，“定量"不僅是對(duì)蛋白存在與否的判斷，更是對(duì)其在不同生理或病理狀態(tài)下表達(dá)變化的jīngzhǔn刻畫(huà)。傳統(tǒng)的同位素標(biāo)記方法如TMT、iTRAQ雖然靈敏度高，但成本較高、流程復(fù)雜。無(wú)標(biāo)記定量技術(shù)（Label-Free Quantification, LFQ）以其樣品處理簡(jiǎn)便、適合大規(guī)模分析、可自由組合樣本等優(yōu)勢(shì)，逐漸成為dànbáizhì組定量研究的主流。

一、LFQ的基本原理：利用質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度或譜圖數(shù)量定量

LFQ依賴(lài)高分辨率質(zhì)譜（如Orbitrap）對(duì)樣品進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，無(wú)需化學(xué)或代謝標(biāo)記，即可通過(guò)以下兩種策略進(jìn)行蛋白定量：

1、MS1信號(hào)強(qiáng)度（Intensity-Based Quantification）

每個(gè)肽段在一級(jí)質(zhì)譜（MS1）中具有特定的峰面積或離子強(qiáng)度，可以反映其相對(duì)豐度。

2、譜圖計(jì)數(shù)法（Spectral Counting）

通過(guò)統(tǒng)計(jì)肽段在MS2中被識(shí)別的次數(shù)（PSM數(shù)量）作為豐度的替代指標(biāo)，適用于高豐度蛋白的定量比較。

百泰派克生物科技基于MaxQuant + Perseus等主流平臺(tái)，整合信號(hào)強(qiáng)度與譜圖計(jì)數(shù)兩類(lèi)策略，為客戶(hù)提供高重復(fù)性、低噪聲的無(wú)標(biāo)記定量技術(shù)LFQ數(shù)據(jù)。

二、LFQ的技術(shù)流程全解析

為了獲得可靠的定量結(jié)果，LFQ通常包括以下關(guān)鍵步驟：

1、樣本制備

（1）統(tǒng)一蛋白濃度

（2）yídànbáiméi酶解成多肽

（3）反應(yīng)終止后純化上機(jī)

2、LC-MS/MS分析

（1）采用高分辨率液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜平臺(tái)（如Q Exactive系列）

（2）保證每個(gè)樣品獨(dú)立上機(jī)，避免交叉污染

3、數(shù)據(jù)處理

（1）使用MaxQuant或Proteome Discoverer等軟件提取肽段強(qiáng)度

（2）去除缺失值、標(biāo)準(zhǔn)化處理

（3）統(tǒng)計(jì)顯著差異蛋白

三、無(wú)標(biāo)記定量技術(shù)的優(yōu)勢(shì)與局限

1、優(yōu)勢(shì)

2、局限

（1）樣本間批次差異較大時(shí)，可能出現(xiàn)技術(shù)偏倚

（2）對(duì)質(zhì)譜設(shè)備穩(wěn)定性和操作一致性要求高

（3）缺失值處理對(duì)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法依賴(lài)性強(qiáng)

百泰派克在LFQ服務(wù)中設(shè)置質(zhì)控樣 + 仿真調(diào)控樣本，顯著提升跨批次穩(wěn)定性與差異蛋白檢出率。

四、LFQ的經(jīng)典應(yīng)用場(chǎng)景

1、疾病機(jī)制研究

LFQ可揭示疾病組織與正常組織在dànbáizhì表達(dá)層面的差異，輔助構(gòu)建調(diào)控通路網(wǎng)絡(luò)。

2、藥物作用機(jī)制探索

通過(guò)比較藥物處理前后蛋白組變化，評(píng)估靶點(diǎn)表達(dá)及下游信號(hào)影響。

3、環(huán)境應(yīng)激與毒理響應(yīng)分析

用于研究細(xì)胞或微生物在高溫、重金屬、氧化應(yīng)激等條件下的蛋白響應(yīng)模式。

4、外泌體蛋白組定量

結(jié)合高靈敏度質(zhì)譜，LFQ成為外泌體功能蛋白譜構(gòu)建的重要工具。

五、zuì新進(jìn)展：LFQ正在邁向更高精度與更強(qiáng)適應(yīng)性

1、DIA（Data-Independent Acquisition）+ LFQ

通過(guò)全掃描方式獲取MS/MS數(shù)據(jù)，結(jié)合Spectronaut、DIA-NN等算法，實(shí)現(xiàn)更高數(shù)據(jù)完整性和定量一致性。

2、AI算法優(yōu)化定量流程

基于機(jī)器學(xué)習(xí)的缺失值補(bǔ)全、差異蛋白篩選、功能預(yù)測(cè)技術(shù)正在加速LFQ數(shù)據(jù)從“結(jié)果"到“發(fā)現(xiàn)"的轉(zhuǎn)化。

3、多組學(xué)聯(lián)合分析趨勢(shì)

LFQ蛋白組數(shù)據(jù)正越來(lái)越多與轉(zhuǎn)錄組、代謝組、磷酸化組等多組學(xué)數(shù)據(jù)融合使用，提升機(jī)制解析的系統(tǒng)性。

百泰派克生物科技：一站式無(wú)標(biāo)記定量蛋白服務(wù)平臺(tái)

作為生命科學(xué)CRO服務(wù)提供商，百泰派克生物科技深耕蛋白組學(xué)領(lǐng)域十余年，構(gòu)建了完善的LFQ服務(wù)體系，服務(wù)特色：

• 高通量Orbitrap平臺(tái)，適配LFQ/DIA全策略

• 提供蛋白提取、質(zhì)譜上機(jī)、數(shù)據(jù)分析一體化方案

• 融合生物通路富集、PPI分析、GO/KEGG注釋等zhuānyè生信服務(wù) 可配套多組學(xué)聯(lián)合方案（如LFQ+轉(zhuǎn)錄組），推動(dòng)科研從“變化"走向“機(jī)制"

無(wú)標(biāo)記定量技術(shù)作為一種兼具成本效率與研究深度的策略，已成為現(xiàn)代dànbáizhì組學(xué)中bùkěhuòquē的工具。未來(lái)，隨著儀器性能、算法水平與數(shù)據(jù)庫(kù)質(zhì)量的持續(xù)提升，LFQ將邁入更智能、更系統(tǒng)、更jīngzhǔn的時(shí)代。如果您正在開(kāi)展蛋白表達(dá)、疾病機(jī)制、藥物篩選等相關(guān)研究，歡迎聯(lián)系我們獲取LFQ個(gè)性化服務(wù)方案！百泰派克生物科技助您高效獲取可靠數(shù)據(jù)，推動(dòng)成果落地！

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線(xiàn)性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專(zhuān)有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶(hù)提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶(hù)提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿(mǎn)足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶(hù)的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

無(wú)標(biāo)記定量技術(shù)（LFQ）：原理、應(yīng)用與最新進(jìn)展檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹