C端序列分析檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

蛋白由若干氨基酸脫水縮合排列構(gòu)成，含有一個(gè)游離的氨基（N端）和一個(gè)游離的羧基（C端）。C端與N端一樣，在dànbáizhì分子結(jié)構(gòu)分析中具有重要的地位，是dànbáizhì完整一級結(jié)構(gòu)的必須信息，對C端序列進(jìn)行測定具有重要的意義。

北京百泰派克生物科技有限公司基于CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量認(rèn)證體系，根據(jù)肽圖分析（質(zhì)譜法）原理，建立了針對于不同類別生物制品的蛋白C端序列分析服務(wù)，可實(shí)現(xiàn)對蛋白、抗體、疫苗、多肽、重組膠原蛋白等生物制品C端序列的測定。

目前尚未開發(fā)出類似于Edman降解的C端序列測定技術(shù)，因此蛋白C端序列的確證服務(wù)仍然是以質(zhì)譜平臺為基礎(chǔ)。根據(jù)靶蛋白理論序列信息選擇互補(bǔ)性好的兩種蛋白酶酶切蛋白，產(chǎn)生兩個(gè)長度不同但是適宜離子化的C端肽段，經(jīng)質(zhì)譜檢測，相互驗(yàn)證，zuì終確定蛋白C端序列。

附常見蛋白酶酶切條件及位點(diǎn)：

• 納升級高效液相色譜儀：Easy-nLC 1200；

• 組合型四極桿-Orbitrap質(zhì)譜儀：Q Exactive™ Hybrid Quadrupole-Orbitrap™ Mass Spectrometer。

樣品蛋白經(jīng)過適合的蛋白酶酶切之后變成長度大多在6-28aa的肽段，進(jìn)入質(zhì)譜分析后產(chǎn)生的總離子流譜圖如下：

樣品總離子流譜圖（TIC）

（橫坐標(biāo)為時(shí)間（min），縱坐標(biāo)為相對信號強(qiáng)度）

通過一級質(zhì)譜圖可以得到完整肽段的分子量，mass=(m/z-1)*z

C端肽段一級質(zhì)譜圖

（橫坐標(biāo)為檢測到的m/z值，縱坐標(biāo)為相對信號強(qiáng)度）

二級質(zhì)譜圖得到的是肽段的碎片離子m/z值，完整肽段在質(zhì)譜中從肽鍵位置被打碎為碎片離子，靠近肽段的N端的為b離子，靠近C端的為y離子（例如二級圖中的肽段KTSTSPLVKSF,二級碎裂之后，碎片離子K和TSTSPLVKSF分別為b1和y10離子，碎片離子KT和STSPLVKSF分別為b2和y9離子）。理論的碎片離子m/z與實(shí)際二級圖中的檢測值匹配到的越多，可信度越高。通過肽段二級碎裂片段信息確定C端肽段序列

肽段二級質(zhì)譜圖

（橫坐標(biāo)為檢測到的m/z值，縱坐標(biāo)為相對信號強(qiáng)度）

實(shí)際項(xiàng)目中會(huì)至少使用兩種互補(bǔ)的蛋白酶對靶蛋白進(jìn)行酶切，可以得到兩條長度不同的C端肽段，通過對于兩條C端肽段序列的相互驗(yàn)證，zuì終確定蛋白的C端序列信息。

問題1：蛋白經(jīng)過酶切后會(huì)在固定的位點(diǎn)斷開，如何確定C端的肽段就是蛋白C端呢？

回答：數(shù)據(jù)分析的時(shí)候會(huì)挑選N端為酶切位點(diǎn)而C端不是酶切位點(diǎn)的肽段，保證肽段是酶切形成的而不是隨機(jī)的雜質(zhì)肽段，同時(shí)保證肽段末端與對比末端是統(tǒng)一的。

問題2：如果分析結(jié)果只有C末端為酶切位點(diǎn)的肽段，如何進(jìn)步確認(rèn)C端具體位置？

回答：這種結(jié)果通常是兩種情況造成的。dìyī種情況是蛋白的C端正好是酶切位點(diǎn)，我們可以通過不同酶切同時(shí)分析排除這種情況。第二種是蛋白C端離該酶切位點(diǎn)很近或很遠(yuǎn)，酶切之后剩余片段太短或太長，碎裂情況太差，無法被分析軟件識別到，我們可以建立一個(gè)梯度數(shù)據(jù)庫，每個(gè)序列比上一下序列多一個(gè)氨基酸，利用梯度數(shù)據(jù)庫重新比對分析。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

C端序列分析檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹