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檢測原理：試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人抗AECA抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體（AECA）的存在與否。

人抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)ELISA檢測試劑盒性能：

1.  準(zhǔn)確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗(yàn)結(jié)果有效。

2.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

3.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

結(jié)果判斷：

1.  試驗(yàn)有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

人抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)ELISA檢測試劑盒操作注意事項(xiàng)：

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

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