检测原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牙本质涎磷蛋白抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的牙本质涎磷蛋白呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

实验所需自备试验器材：

1.      酶标仪（450nm）

2.      高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.      37℃恒温箱

4.      蒸馏水或去离子水

人牙本质涎磷蛋白(DSPP)ELISA检测试剂盒组成：（检测范围请参考说明书）

常见样本处理及要求：

可用于ELISA实验的样本一般有血清、血浆、尿液、细胞培养上清液以及组织匀浆等。不同样本类型的预处理方法也不同。

液体样本处理原则：所有的液体样本，用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分）

【血清样本】：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注意事项：收集血液样本应避免溶血，因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质，这种情况下，ELISA实验中将会出现非特异性显色反应，导致检测结果不准确，出现假阳性结果。另外，样本还应避免细菌污染，因为细菌可能含有内源性HRP，也会导致检测结果不准确。

【血浆样本】：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注意事项：检测前请仔细阅读ELISA试剂盒说明书，查看该试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。

实验操作中注意事项：

1.      严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2.      洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3.      消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.      底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5.      避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.      在储存和温育时避免强光直接照射。

7.      平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.      任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9.      不能使用过期产品。

10.   如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

请严格按照产品说明书操作，如需产品说明书可直接来电索取或添加客服索取。

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