如何工作

双抗体夹心法

1. 包被：以 0.05 MPH 稀释抗体至蛋白质含量为 1-10 μg/ml。 9. 含氧碳酸盐涂层缓冲液。在 4 °C 下将 0.1 ml 添加到每个聚苯乙烯板的反应孔中过夜。次日，将溶液从孔中取出并用洗涤缓冲液洗涤3次，每次3分钟。 （以下也清洗）。

2、加样：将0.1ml特定稀释度的待测样品加入上述包被的反应液中，37℃孵育1小时。然后洗。 （同时创建空白孔、阴性对孔和阳性对照孔）。

3. 酶标抗体的加入：每个反应孔中加入新鲜稀释的酶标抗体（滴定后稀释）0.1ml。在 37°C 下孵育 0.5-1 小时并洗涤。

4、加入底物溶液显色：在每个反应孔中加入0.1ml临时配制的TMB底物溶液，37℃孵育10-30分钟。

5. 反应结束：每孔加入 0.05 ml 2M 硫酸。

6、结果评价：在白色背景上可以用肉眼直接观察结果。反应孔越深，阳性反应越强，阴性反应无色或极淡。表示“-"符号。您还可以测量 OD 值。在 450 nm（ABTS 显色时为 410 nm）使用 ELISA 检测器，使用空白对照孔至零，如果大于 OD 值的 2.1 倍，则测量每个孔的 OD 值。阴性对照为阳性。

间接法

1. 用包被缓冲液将已知抗原稀释至 1-10 μg/ml，每孔加入 0.1 ml，4 °C 过夜；

2.次日洗3次；

3、在上述反应孔中加入0.1mL稀释的待测样品（未知抗体），37℃孵育1小时，洗涤；

4.（空白、阴性、阳性对照同时进行）反应孔中加入新鲜稀释的酶标二抗0.1mL；

5. 37°C孵育35-60分钟，洗涤；

6.'最后用 DDW 洗涤。

其余步骤同“双抗体夹心法"中的4、5、6。

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