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2xLab SuperHiFi PCR Master Mix（含染料）

貨號：T1212

儲存條件：-20℃

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品簡介：

2xLab SuperHiFi PCR Master Mix（含染料）是即用型2×預(yù)混合溶液，包含Lab Super High-Fidelity DNA Polymerase、dNTPs 和精心優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，只需加入模板、引物和水即可進(jìn)行高保真PCR反應(yīng)。本產(chǎn)品適用于以基因組DNA、cDNA、質(zhì)粒以及粗品為模板的PCR反應(yīng)。預(yù)混液中包含紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。預(yù)混液中的紅色染料與1500 bp 雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近;黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 保真度高，擴(kuò)增速度快：保真度是普通Taq酶的70倍，擴(kuò)增速度是Pfu的5倍。

2. 擴(kuò)增片段長度長：使用λDNA、質(zhì)粒等簡單模板時，可以輕松擴(kuò)增長達(dá)20 kb的片段；而使用基因組DNA等復(fù)雜模板時，能有效擴(kuò)增長達(dá)12 kb的片段。

3. 2× Lab SuperHF PCR Master Mix對PCR抑制劑具有良好的耐受能力，對粗提樣本也能進(jìn)行很好的擴(kuò)增。

反應(yīng)體系：                                      

模板用量：

a. 當(dāng)擴(kuò)增片段 GC 含量 >60% 且優(yōu)化條件也無法正常擴(kuò)增時，推薦使用 2.5×PCR Enhancer來優(yōu)化 PCR 反應(yīng)。與無染料的2× S705 HiFi Master Mix（T1211）相比，T1212所需的PCR Enhancer更少，請避免加入過量Enhancer導(dǎo)致擴(kuò)增失敗程序推薦：Touchdown PCR（降落 PCR）程序。

反應(yīng)程序：

①三步法：

b. 對于普通模板，預(yù)變性可縮短至30~60 s；對于復(fù)雜模板，例如高 GC 序列，推薦延長預(yù)變性時間到3~5 min 以充分變性；

c. 根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置退火溫度。如引物Tm值≥72℃，可刪除退火步驟，直接進(jìn)行后續(xù)的延伸步驟(兩步法PCR)。如果需要，可以建立一個溫度梯度尋找引物與模板結(jié)合的最適溫度。此外，退火溫度直接決定擴(kuò)增特異性。如發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增特異性差，可適當(dāng)提高退火溫度;

d. 對于大多數(shù)模板，30s/kb即可有效擴(kuò)增; 對于一些復(fù)雜模板，可延長延伸時間至30~60 s/kb。

②兩步法^e：

e. 通常情況下使用兩步法和三步法進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，性能無顯著差異，可以根據(jù)操作習(xí)慣自行選擇。但對于一些復(fù)雜模板(如長片段，Tm 分布不均勻，特殊結(jié)構(gòu)模板)，可以嘗試兩步法或者Touchdown PCR (降落PCR)法。此外，使用質(zhì)粒為模板進(jìn)行點(diǎn)突變時，也建議使用兩步法。

③Touchdown PCR（降落 PCR）^f法：

f. 該程序僅供參考，Touchdown PCR (降落PCR)有多種程序可靈活調(diào)整，請根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求與習(xí)慣自行決定是否采用。

注意事項(xiàng)：

1. 請不要使用含尿mi啶的引物和模板。

2. Lab Super High-Fidelity DNA Polymerase具有較強(qiáng)的校正活性，產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物是平末端，如果用于下一步克隆實(shí)驗(yàn)，建議使用平末端克隆。如果擴(kuò)增產(chǎn)物需要用于TA克隆，加A之前須*行DNA純化。

3. 為了提高擴(kuò)增成功率和產(chǎn)量，請使用高質(zhì)量的模板。

4. 請?jiān)O(shè)置PCR儀程序時選擇“Tube"而不是“Block"模式，部分機(jī)型兩種模式升降溫差異較大，“Block"模式可能導(dǎo)致復(fù)雜模板擴(kuò)增失敗。