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2xTaq PCR Forest Mix 綠色（含染料）

產(chǎn)品貨號(hào)：T0212

存儲(chǔ)條件：-20℃

產(chǎn)品說明

2xTaq PCR Forest Mix 綠色（含染料）的濃度為 2x，使用方便快捷，能減少 PCR操作過程中的污染，使用時(shí)只需取適量2xTaq PCR Forest Mix綠色)，加入模板和引物，并加入ddH2O 補(bǔ)足體積，使反應(yīng)體系濃度為 1x，即可進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。PCR 產(chǎn)物 3'端帶突出A堿基，純化后可直接用于 T/A 克隆。

本產(chǎn)品能夠高效擴(kuò)增≤5 kb 的 DNA 片段，擴(kuò)增產(chǎn)量高PCR Mix中包含兩種染料，PCR產(chǎn)物無需添加Loading Buffer可直接點(diǎn)樣電泳，且電泳過程中會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)指示條帶。該染料不影響PCR擴(kuò)增效率，但對(duì)于需要對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行吸光度、熒光等光學(xué)分析的實(shí)驗(yàn)，建議在分析前對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化，或使用無染料的PCR Master Mix。

質(zhì)量控制

核酸內(nèi)切酶活性檢測(cè)

將25 μl 2xTaq PCR Forest Mix與 200 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 配制成 50 μl 反應(yīng)體系，在37°C下，共同溫育4h后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，少于 10% 的質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)變成缺刻或線性狀態(tài)。

非特異性核酸酶活性檢測(cè)

將25 μl 2xTaq PCR Forest Mix與 15 ng 雙鏈 DNA 片段配制成 50 μl反應(yīng)體系，在 37℃下溫育 16 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)雙鏈 DNA 底物無變化。

使用方法

1.常規(guī) PCR 反應(yīng)體系 ( 冰上操作 )

a. 需融解完quan后使用，防止離子濃度不均勻；

b. 引物推薦終濃度為0.2~0.4 μM，效果不佳時(shí)可以在 0.1~1 μM 濃度范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整；

c. 不同模板最佳反應(yīng)濃度有所不同，以 50 μl 體系為例：模板為基因組 DNA 時(shí)一般推薦的使用量為 10~400 ng；當(dāng)模板為質(zhì)?；虿《?DNA 時(shí)，一般推薦的使用量為 10 pg~20 ng。

2. 三步法 PCR 反應(yīng)程序

d. 菌落 PCR 時(shí)預(yù)變性 10 min，可充分破壁細(xì)胞，大腸桿菌或酵母菌均可高效擴(kuò)增。

e. 退火溫度請(qǐng)根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置。如果需要，推薦通過建立溫度梯度尋找引物與模板結(jié)合的最適溫度。此外，退火溫度直接決定擴(kuò)增特異性，如發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增特異性差，可適當(dāng)提高退火溫度。

f. 目的片段長(zhǎng)度< 3 kb，延伸時(shí)間可縮短至 30 s/kb；目的片段長(zhǎng)度>3 kb，延伸時(shí)間建議 60 s/kb。