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貨號(hào)：F7502S

儲(chǔ)存條件：-20℃

同裂酶：Bsp120I, PspOMI 

注：同裂酶對(duì)于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品簡介

LabFD™ 快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒  DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組  DNA 等的快速酶切。 所有  LabFD™ 快速內(nèi)切酶在通用的LabFD™或LabFD™ Color Buffer中都具有優(yōu)良的活性，能夠在  5~15 分鐘內(nèi)完成酶切。此外，蘭博  利德去磷酸化、連接試劑在LabFD™  Buffer 中均具有  100% 活性，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切-修飾-連接"的體驗(yàn)。

LabFD™ Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。LabFD™ Color Buffer  的紅色染料與 2500 bp  雙鏈DNA 片段在1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與10 bp雙鏈  DNA  片段在  1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

建議反應(yīng)條件

1×LabFD™緩沖液；37℃溫育；參照“DNA快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

失活條件

80℃溫育20min。

質(zhì)量控制

功能活性檢測

37℃下，在20ul反應(yīng)體系中，1ul LabFD™ ApaI能夠在15min內(nèi)完quan消化1ug p615 DNA。

超長時(shí)間溫育檢測

37℃下，將1ul LabFD™ ApaI與1ug p615 DNA共同溫育3h，未檢測到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解，更長時(shí)間酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。

酶切-連接-再酶切檢測

37℃下，使用10 倍酶量的LabFD™ ApaI 消化DNA 底物，回收酶切產(chǎn)物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast)  可以將超過 95% 的酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開 95% 以上的連接產(chǎn)物。

使用方法

1.DNA快速酶切流程

①在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

②輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；

③75℃溫育15 min（質(zhì)粒），或30~60 min（基因組 DNA）；

④80℃溫育20min即可使酶失活，停止反應(yīng)（可選）；

⑤如果使用 LabFD™ Color Buffer 進(jìn)行酶切反應(yīng)，得到的產(chǎn)物可以直接進(jìn)行上樣電泳。

2.雙酶切或多酶切

①每種快速內(nèi)切酶的用量為1ul，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系；

②所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10；

③如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。

3.適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系

注：如果總反應(yīng)體系大于20ul，應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自LABLEAD限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。