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原代細胞質粒DNA轉染試劑

貨號：T2120

存儲條件：: 4-8℃保存，有效期一年。每次使用之前請先將本品上下顛倒混勻。

產品說明：

LabFect Plasmid原代細胞小核酸轉染試劑是專門用于原代細胞質粒DNA轉染的轉染試劑。LabFect Plasmid 具有非常卓yue的轉染性能，可高效轉染多種原代細胞，轉染效率高達70% 以上（EGFP質粒）。LabFect Plasmid不僅可轉染較大分子的質粒DNA，還可轉染RNA和小分子DNA。與目前市場上常見的脂質體轉染試劑不同，LabFect Plasmid 采用生物可降解材料配制，對細胞的毒性很低，轉染后細胞死亡率不到10%。LabFect Plasmid 使用也非常方便，先將轉染試劑與質粒DNA混合，再將轉染試劑-DNA復合物直接加入培養(yǎng)細胞中，血清不影響其轉染效果，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡便。。

產品特點：

卓yue的細胞轉染性能：可高效轉染多種原代細胞，轉染效率高達70%以上；

極低的細胞毒性：使用可降解生物材料，細胞毒性低，轉染細胞死 亡率不到10%，大大降低了因細胞毒性對實驗結果的影響，實驗結 果更為客觀；

操作簡便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞的轉染，轉染前后不需要更換培養(yǎng)液。

注意事項：

因細胞密度隨細胞系不同會有很大差別，且細胞密度直接決定轉染效率，因此請在轉染過程中盡量保持同樣的接種比例，以提高轉染重復性。多數(shù)哺乳動物細胞應在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。其他的一些細胞系，例如昆蟲細胞，需要在不同的溫度和CO2濃度下進行培養(yǎng)。請根據(jù)具體細胞系選擇最shi培養(yǎng)條件。應避免包裝反應體系中存在血清，因血清會干擾LabFect與DNA形成復合物 。如果轉染DNA量較大或者當復合物包裝時反應體系中出現(xiàn)沉淀時, 請將包裝反應體系調整至1ml進行。

適用細胞系：大鼠肝細胞、血管平滑肌細胞、血管內皮細胞、肺泡上皮 細胞、乳腺癌細胞、肺癌細胞、大腸癌細胞、肝癌細胞等

試劑盒內容物：LabFect原代細胞小核酸轉染試劑

方法步驟（以24孔板轉染為例）:

1. 細胞接種:

a. 轉染前24小時左右對細胞進行鋪板（不含抗生素），培養(yǎng)過夜； 

b. 確保轉染時細胞密度達90%-95%。 

2. LabFect/DNA復合物包裝(該步完成后應立即轉染):

a. 在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基，并添加適量的轉染試劑(參見附表) 。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。 

b. 在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基，并添加適量的 DNA，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。 (參見附表。首ci使用建議在附表提供的DNA和轉染試劑參考量的基礎上進行優(yōu)化實驗，以摸索兩者之間的最you搭配比例)。

c. 將LabFect-培養(yǎng)基混合物滴加至DNA-培養(yǎng)基混合物中，用移液器 輕輕混勻后在室溫靜置15~20分鐘后，立即轉染。注意： LabFect-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。 

3. 轉染:

注意：LabFect在*培養(yǎng)基中(基礎培養(yǎng)基中添加血清)具有最gao的轉染效率，因此轉染前后不需要換成無血清培養(yǎng)基。 a. 如特殊情況，可在轉染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉染后孵育階段細胞密度太大、營養(yǎng)不足導致的細胞死亡。

b. 將步驟2制備的復合物滴加至培養(yǎng)基中。輕輕晃動培養(yǎng)皿以使復合物均勻分布。

c. 培養(yǎng)4h后，加入1ul溶液A，輕搖混勻（此步可選，溶液A另購）。

d. 過夜培養(yǎng)24~48小時。

e. 注意:如果轉染后需要更換新鮮培養(yǎng)基，請于加入LabFect/DNA復合物12~24小時后進行。培養(yǎng)基更換后，孵育24~48小時后再進行后續(xù)實驗。

f. 收獲細胞，進行后續(xù)實驗。

質量控制

本產品經嚴格的質量檢驗證明，無生物污染

注意：

本產品僅用于科研實驗

附表：不同培養(yǎng)體系推薦初始轉染條件