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【藥典規(guī)定的支原體檢查法】

        支原體嚴(yán)重影響培養(yǎng)中的細(xì)胞的表型特征和正常生長(zhǎng)，給藥品質(zhì)量安全控制帶來(lái)了極大的風(fēng)險(xiǎn)。因此，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的支原體檢測(cè)非常必要。FDA、WHO等不同國(guó)家和地區(qū)監(jiān)管機(jī)構(gòu)和USP、EP、ChP等法規(guī)均有支原體檢查的規(guī)定，主要包括測(cè)試細(xì)胞庫(kù)（主細(xì)胞庫(kù)、工作細(xì)胞庫(kù)），收獲前的下游細(xì)胞培養(yǎng)物，終產(chǎn)品及對(duì)照細(xì)胞等是否存在支原體污染。

      《中國(guó)藥典》2020版第三部3301支原體檢查法中規(guī)定，主細(xì)胞庫(kù)（MCB）、工作細(xì)胞庫(kù)（WCB）、病毒種子批、對(duì)照細(xì)胞以及臨床治療用細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行支原體檢查?，F(xiàn)行《中國(guó)藥典》規(guī)定的方法仍然是直接培養(yǎng)法和指示細(xì)胞法（DNA染色法）， 這兩種方法周期較長(zhǎng)（直接培養(yǎng)法21天，指示細(xì)胞法3-4天），無(wú)法滿足藥物放行的時(shí)間要求。

       《歐洲藥典》除了這兩種方法法外，還推薦核酸檢測(cè)法(NAT法)。同時(shí)規(guī)定，經(jīng)過(guò)合理的方法學(xué)驗(yàn)證，NAT法可用于替代直接培養(yǎng)法（10cfu/mL）和指示細(xì)胞法(100cfu/mL)。

  【支原體qPCR檢測(cè)試劑盒已完成方法學(xué)驗(yàn)證】

        上海翼和委托第三方專業(yè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)完成了細(xì)胞支原體檢測(cè)試劑盒方法學(xué)驗(yàn)證！該驗(yàn)證項(xiàng)目依據(jù)歐洲藥典推薦的核酸檢測(cè)支原體檢查法驗(yàn)證方案，對(duì)試劑盒的專屬性、檢測(cè)限和耐用性進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明，翼和生物細(xì)胞支原體檢測(cè)試劑盒這三方面特性均符合要求，檢測(cè)靈敏度為10cfu/mL，可替代培養(yǎng)法，用于細(xì)胞存儲(chǔ)庫(kù)、細(xì)胞治療用途的細(xì)胞和生物制品中支原體污染檢測(cè)和放行檢測(cè)。

  【產(chǎn)品規(guī)格】

?【產(chǎn)品說(shuō)明】

??本產(chǎn)品試劑盒采用雙色熒光qPCR(TaqMan探針?lè)?檢測(cè)支原體DNA，檢測(cè)對(duì)象為細(xì)胞培養(yǎng)的上清液或細(xì)胞本身。該試劑盒具有以下特點(diǎn)：

?? 1.靈敏：100拷貝的支原體可被檢出。

?? 2.穩(wěn)定：全程閉管操作，無(wú)交叉污染。    

?? 3.可靠：含內(nèi)參基因，避免假陰性。

?? 4.方便：操作簡(jiǎn)單，無(wú)需電泳步驟。

?? 5.定量：以CT值判斷，可定量檢測(cè)。

?【運(yùn)輸及保存條件】

??低溫冷凍運(yùn)輸， -20℃保存，有效期1年。

?【產(chǎn)品組分】

?? 注：本試劑盒提供試劑，使用前先低速離心、后小心開(kāi)啟。使用時(shí)請(qǐng)上下輕柔顛倒十次混勻，避免起泡，并低速短暫離心后使用。

?【操作步驟】

??1. 細(xì)胞樣品制備，取 1~1.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)上清，1000 rpm 離心3 分鐘， 取 2µL上清作為模板備用；

??2. 根據(jù)支原體檢測(cè)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行混合試劑，配置檢測(cè)體系；

      3. 將反應(yīng)罐放置再熒光PCR擴(kuò)增儀上，根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的反應(yīng)條件進(jìn)行反應(yīng)。

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?【靈敏度測(cè)試和結(jié)果判讀】

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