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上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第2年

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線(xiàn)粒體DNA拷貝數(shù)檢測(cè)

時(shí)間:2025/7/4閱讀:78
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線(xiàn)粒體作為細(xì)胞的“能量工廠(chǎng)",其功能高度依賴(lài)線(xiàn)粒體DNA(mtDNA)的完整性。mtDNA拷貝數(shù)(每個(gè)細(xì)胞中mtDNA的分子數(shù))不僅是評(píng)估線(xiàn)粒體功能的金標(biāo)準(zhǔn),更與衰老、代謝紊亂、神經(jīng)退行性疾病及癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的興起,mtDNA拷貝數(shù)檢測(cè)技術(shù)已成為疾病診斷、機(jī)制研究和藥物開(kāi)發(fā)的核心工具。

 

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檢測(cè)原理

試劑盒巧妙運(yùn)用雙色熒光 TaqMan 探針?lè)ǘ?PCR 技術(shù)

細(xì)胞內(nèi)線(xiàn)粒體檢測(cè)時(shí),FAM 熒光精準(zhǔn)追蹤線(xiàn)粒體拷貝數(shù),HEX熒光同步記錄細(xì)胞數(shù)目,二者協(xié)同,依托標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),勾勒出線(xiàn)粒體在細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)分布圖。

而游離線(xiàn)粒體檢測(cè),FAM 熒光專(zhuān)注計(jì)算線(xiàn)粒體拷貝數(shù),HEX熒光則化身質(zhì)檢員,對(duì)游離基因組 DNA 抽提質(zhì)量嚴(yán)格把關(guān),確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)的檢測(cè)方案,通過(guò)以下創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)了技術(shù)躍升:  

1) 特異性探針設(shè)計(jì):針對(duì)mtDNA保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物與探針,避免核基因組DNA干擾,特異性高達(dá)99.9%。  

2) 雙標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)校準(zhǔn):引入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和校正品,構(gòu)建動(dòng)態(tài)范圍覆蓋1~10^6拷貝的定量曲線(xiàn),檢測(cè)下限低至1拷貝/μL。  

3) 自動(dòng)化數(shù)據(jù)分析:結(jié)合AI算法優(yōu)化閾值循環(huán)(Ct值)判定,減少人為誤差,提升重復(fù)性(CV值<5%)。  

 

 

實(shí)力見(jiàn)證:科研與臨床的雙重認(rèn)可

在細(xì)胞內(nèi)線(xiàn)粒體拷貝數(shù)檢測(cè)的科研戰(zhàn)場(chǎng)上,清晰描繪出線(xiàn)粒體拷貝數(shù)隨年齡增長(zhǎng)的變化軌跡,為衰老機(jī)制研究提供關(guān)鍵證據(jù)。

而在游離線(xiàn)粒體領(lǐng)域,通過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)?/span> spearman 相關(guān)系數(shù)分析,試劑盒精準(zhǔn)揭示出游離線(xiàn)粒體與年齡、性別的微妙關(guān)系,為相關(guān)研究提供了重要參考,助力科研人員深入探究線(xiàn)粒體在不同生理狀態(tài)下的奧秘。

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