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原位雜交技術(shù)原理及分類

閱讀:573      發(fā)布時間:2024-12-7
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原位雜交技術(shù)(In situ hybridization,ISH)是分子生物學、組織化學及細胞學相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù),以下是該技術(shù)的原理及分類:
基本原理
原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列,將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對,結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。
技術(shù)分類
RNA原位雜交:又稱RNA原位雜交組織化學,是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內(nèi)RNA表達的一種原位雜交技術(shù)。其基本原理是:在細胞或組織結(jié)構(gòu)保持不變的條件下,用標記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對原則,與待測細胞或組織中相應的基因片段相結(jié)合(雜交),所形成的雜交體經(jīng)顯色反應后在光學顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細胞內(nèi)相應的mRNA、rRNA和tRNA分子。
基因組原位雜交(Genome in situ hybridization,GISH):利用物種之間DNA同源性的差異,用另一物種的基因組DNA以適當?shù)臐舛茸鞣庾?,在靶染色體上進行原位雜交。
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH):在已有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性DNA分子原位雜交技術(shù)。它利用熒光標記的核酸片段為探針,與染色體上或DNA顯微切片上的特異序列進行雜交,通過熒光檢測系統(tǒng)(熒光顯微鏡)檢測信號DNA序列在染色體或DNA顯微切片上的目的DNA序列,進而確定其雜交位點。FISH技術(shù)檢測時間短,檢測靈敏度高,無污染,已廣泛應用于染色體的鑒定、基因定位和異常染色體檢測等領(lǐng)域。
多彩色熒光原位雜交(Multicolor fluorescence in situ hybridization,mFISH):在FISH技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù),它用幾種不同顏色的熒光素單獨或混合標記的探針進行原位雜交,能同時檢測多個靶位,各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同,呈現(xiàn)多種色彩。

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