亚洲精品综合日韩中文字幕网站_精品综合久久久久97_中文在线天堂网www_久久精品免费一区二区三区_91久久国产综合精品女同国语_久久资源总站在线国产成人

ELISA試劑盒底物的顯色原理

時(shí)間:2025/2/24閱讀:379
分享:

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)的底物顯色原理基于酶催化反應(yīng)產(chǎn)生的顏色變化,通過(guò)這一變化實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的定性或定量檢測(cè)。以下是其核心原理的詳細(xì)說(shuō)明:

1. 基本流程
- 抗原-抗體結(jié)合:目標(biāo)抗原被固定在固相載體(如微孔板)上,與特異性抗體結(jié)合。
- 酶標(biāo)記抗體:通過(guò)直接或間接法(如二抗)引入酶標(biāo)記的抗體(常用酶包括辣根過(guò)氧化物酶HRP、堿性磷酸酶AP等)。
- 底物反應(yīng):加入無(wú)色底物,酶催化底物分解,生成有色產(chǎn)物。

2. 顯色反應(yīng)的關(guān)鍵步驟
(1) 酶的選擇與對(duì)應(yīng)底物
- HRP(辣根過(guò)氧化物酶):
- 底物:TMB(3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺)、OPD(鄰苯二胺)、ABTS(2,2'-聯(lián)氮雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)。
- 反應(yīng)原理:在過(guò)氧化氫(H?O?)存在下,HRP催化底物氧化。
- 例如,TMB被氧化后生成藍(lán)色產(chǎn)物(最大吸收波長(zhǎng)450 nm),加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色(吸收波長(zhǎng)450 nm)。
- 特點(diǎn):靈敏度高、反應(yīng)快速,需酸性終止液。

- AP(堿性磷酸酶):
- 底物:pNPP(對(duì)硝基苯磷酸酯)、BCIP/NBT(5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽/氮藍(lán)四唑)。
- 反應(yīng)原理:AP催化底物水解。
- pNPP水解生成黃色的對(duì)硝基苯酚(吸收波長(zhǎng)405 nm)。
- BCIP/NBT生成藍(lán)色/紫色沉淀(適用于肉眼觀察或比色法)。
- 特點(diǎn):反應(yīng)較溫和,無(wú)需終止液,適合長(zhǎng)時(shí)間孵育。


(2) 顏色變化的定量分析
- 顯色產(chǎn)物的吸光度(OD值)與目標(biāo)分子濃度呈正相關(guān),通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)量特定波長(zhǎng)下的吸光度值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線即可實(shí)現(xiàn)定量分析。


3. 其他類(lèi)型底物
除了顯色底物,ELISA還可使用以下底物系統(tǒng):
- 熒光底物:酶催化底物生成熒光物質(zhì)(如HRP催化Ampliflu Red),通過(guò)熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)。
- 化學(xué)發(fā)光底物:酶催化底物產(chǎn)生光信號(hào)(如HRP催化魯米諾),通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè),靈敏度更高。


4. 關(guān)鍵影響因素
- 酶活性:溫度、pH、抑制劑可能影響酶反應(yīng)效率。
- 底物穩(wěn)定性:需避光保存(如TMB見(jiàn)光易分解)。
- 反應(yīng)時(shí)間:顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致背景信號(hào)升高。


5. 應(yīng)用場(chǎng)景
- 顯色底物(如TMB、pNPP)適用于常規(guī)ELISA檢測(cè)。
- 化學(xué)發(fā)光/熒光底物適用于高靈敏度檢測(cè)(如低豐度蛋白、細(xì)胞因子)。

通過(guò)這一原理,ELISA實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白質(zhì)、抗體、病毒等生物分子的高特異性檢測(cè),廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、生物研究和藥物開(kāi)發(fā)領(lǐng)域。


會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言
汤原县| 玉林市| 乡宁县| 错那县| 正宁县| 司法| 天水市| 鲁山县| 泊头市| 泾源县| 西藏| 长汀县| 萨嘎县| 全州县| 周宁县| 年辖:市辖区| 临汾市| 济宁市| 锦屏县| 彩票| 山阳县| 平安县| 会昌县| 仙居县| 三亚市| 南涧| 孟连| 张家港市| 色达县| 紫金县| 东城区| 崇仁县| 涿鹿县| 霍邱县| 博白县| 准格尔旗| 宣武区| 当阳市| 社会| 克山县| 新兴县|