你們細胞是怎么凍存的?求解!!!我的是4度冰箱放半小時,-20度冰箱半小時,然后轉(zhuǎn)移到-80度冰箱!但是放在-80度冰箱1個月后,細胞復(fù)蘇就感覺狀態(tài)不太好了!!

做實驗前要先學(xué)會凍存，以備自己在后面的實驗中能保持同一來源、穩(wěn)定可靠的細胞，且可減少污染或其它不利影響。

影響凍存細胞活性的因素

1、細胞凍存保護劑：常用的有二甲基亞砜（DMSO）和甘油，常用的濃度為5%-10%（90%小牛血清）。DMSO對二倍體細胞的毒性較甘油小。

2、細胞懸液的凍結(jié)速度：慢凍時冰凍在細胞外形成，因此不致?lián)p害細胞。多數(shù)細胞以每分鐘下降1℃的速度，降至-20℃凍結(jié)。均可獲得滿意效果。

3、保存溫度：液氮罐，可達到-196℃，此時所有的物理化學(xué)活動均降至zui低限度，以保證細胞長期保存。

4、復(fù)蘇：急速融化復(fù)蘇可防止損害細胞。凍結(jié)細胞從液氮中取出后，應(yīng)立即放入37℃~43℃的水浴中，30秒至一分鐘內(nèi)融化。