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DTT(二硫蘇糖醇)的作用

時間:2023/1/31閱讀:3569
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DTT(二硫蘇糖醇)的作用

         DTT即DL-Dithiothreitol,中文名為二硫蘇糖醇。分子式為C4H10O2S2,分子量為154.25,。常用還原劑,有抗氧化作用。DTT和巰基乙醇相比,作用相似,但DTT的刺激性氣味要小很多,毒性也比巰基乙醇低很多。而且DTT比巰基乙醇的濃度低7倍時,兩者效果相近。

DTT的特性:
        DTT是一種很強的還原劑,其還原性很大程度上是由于其氧化狀態(tài)六元環(huán)(含二硫鍵)的構(gòu)象穩(wěn)定性。它的氧化還原電勢在pH為7時為-0.33伏。
        由于容易被空氣氧化,因此DTT的穩(wěn)定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長它的使用壽命。由于質(zhì)子化的硫的親核性較低,隨著pH值的降低,DTT的有效還原性也隨之降低;而Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP鹽酸鹽)可以作為低pH值條件下DTT的替代品,而且也比DTT更為穩(wěn)定。
1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)溶液配制方法:
        用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。
【注意】DTT或含有DTT的溶液不能進行高壓處理。
DTT的作用:
         DTT的用途之一是作為巰基化DNA的還原劑和去保護劑。巰基化DNA末端硫原子在溶液中趨向于形成二聚體,特別是在存在氧氣的情況下。這種二聚化大大降低了一些偶聯(lián)反應(yīng)實驗(如DNA在生物感應(yīng)器中的固定)的效率;而在DNA溶液中加入DTT,反應(yīng)一段時間后除去,就可以降低DNA的二聚化。
        DTT也常常被用于蛋白質(zhì)中二硫鍵的還原,可用于阻止蛋白質(zhì)中的半胱氨酸之間所形成的蛋白質(zhì)分子內(nèi)或分子間二硫鍵。但DTT往往無法還原包埋于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)內(nèi)部(溶劑不可及)的二硫鍵,這類二硫鍵的還原常常需要先將蛋白質(zhì)變性(高溫加熱或加入變性劑,如6M鹽酸胍、8M尿素或1%SDS)。反之,根據(jù)DTT存在情況下,二硫鍵還原速度的不同,可以判斷其包埋程度的深淺。


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