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一、产品简介
货号：SN3001
本试剂盒采用阴选的方式，通过无柱磁极分离人PBMC中的CD19 B细胞。分离过程中抗体和磁珠不会接触CD19 B细胞，能够最大限度保持B细胞最原始的状态。
• 操作简便
• 纯度最高可达99%
• 18-20分钟完成分离
试剂盒通过生wu素偶联的抗体标记非CD19 B细胞，再将细胞和链霉亲和素纳米磁珠孵育偶联，然后通过磁极进行无柱分离。目标细胞只需倒入一个新的管中即可分离，分离后的细胞可立即用于后续应用，如流式细胞术、细胞培养和功能实验等。
二、试剂盒组分
产品名称 | 存储条件 | 缓冲液成分 | 功能 |
EasyIso™ Human FcR Blocker | 4°C保存，避免冷冻 | PBS, 0.1% BSA | 封闭FcR受体，降低抗体非特异性结合 |
EasyIso™ Human CD19 B cell Isolation Cocktail | 4°C保存，避免冷冻 | PBS, 0.1% BSA | 识别非CD19 B细胞抗体混合液，标记非目的细胞 |
EasyIso™ Streptavidin Nanobeads | 4°C保存，避免冷冻 | PBS, 0.1% BSA | 磁珠结合非CD19 B细胞，通过磁极去除 |
BSA - bovine serum albumin; PBS - phosphate-buffered saline
运输条件： 4°C运输
三、设备和试剂要求
· 缓冲液：FACS Buffer (1 x PBS+0.02% EDTA+2% FBS)
· 耗材：70 μm无菌尼龙滤网；无菌离心管
· 仪器：离心机，磁力架
温馨提示
· 推荐采用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心分离PBMC，不建议采用红细胞裂解液
· 采用FACS Buffer而不是PBS进行操作，能够提高细胞得率
· 确保FACS Buffer渗透压稳定，免疫细胞较为敏感
· 确保每一步无菌操作，谨防污染
四、操作步骤
步骤 | 说明 | 剂量和时间 |
1 | 准备PBMC单细胞悬液至指定浓度 | 1 x 10^8 cells/mL |
2 | 加入EasyIso™ Human FcR Blocker至样品中 | 100 μL/mL |
3 | 加入EasyIso™ Human CD19 B cell Isolation Cocktail至样品中 | 100 μL/mL |
4 | 抗体和细胞孵育 | 常温孵育10 min |
5 | 震荡混匀 Streptavidin Nanobeads | 混匀30 s |
6 | 加Streptavidin Nanobeads至样品中 | 100 μL/mL |
7 | 轻柔混匀磁珠和细胞，孵育 | 常温孵育5 min |
8 | 加入FACS Buffer到样品中，轻轻混匀 | 总体积加入至2.5 mL （5 mL流式管） 总体积加入至 7.5 mL (15 mL离心管) |
9 | 样品置于磁力架上，使磁珠吸附 | 单孔磁力架吸附（3 min） 联排磁力架吸附（5 min） |
10 | 倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品 | 细胞分离成功 |
五、数据展示：
如图：采用Immuno-X系列产品（SN3001#）分离PBMC中的CD19 B 细胞并进行体外培养。（A）采用（#SN3001）分离健康人PBMC中CD19 B细胞，采用CD3和CD19的流式抗体进行染色（B）分选后的CD19 B细胞纯度高达97.4%。
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