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IHC出現(xiàn)假陽性、假陰性等問題該怎么辦?

閱讀:546      發(fā)布時間:2024-11-13
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?免疫組化(IHC)實驗中出現(xiàn)假陽性和假陰性了怎么辦呢?


一、假陽性的處理

1. ?降低一抗?jié)舛?/span>?:通過降低一抗的濃度,可以減少非特異性結(jié)合,從而降低假陽性。通常,降低濃度至能看到陽性表達且能明顯區(qū)分陽性區(qū)域與周圍間質(zhì)即可?。

2. ?調(diào)整封閉條件?:逐步提高封閉條件,從山羊血清到5%BSA+山羊血清,最終至5%脫脂奶。通常調(diào)整至5%BSA+山羊血清即可,不建議輕易使用5%脫脂奶?

3. ?選擇合適的二抗?:對于動物標本,選擇抗鼠或抗兔的二抗,避免使用通用型二抗,以免種屬間抗原抗體反應(yīng)引起假陽性?。

image.png

二、假陰性的處理

?抗原修復(fù)?通過抗原修復(fù)技術(shù)可以增加抗原的暴露,從而提高檢測的靈敏度,減少假陰性?。

三、實驗操作中的常見問題及解決方法

1. ?個體差異?:個體差異可能導(dǎo)致某些人的體內(nèi)存在與抗體相似的物質(zhì),從而導(dǎo)致假陽性。通過多次重復(fù)實驗和嚴格控制實驗條件可以減少這種影響?

2. ?實驗操作誤差?:樣本污染、操作不規(guī)范等可能導(dǎo)致假陽性。嚴格遵守實驗操作規(guī)程,確保樣本的純凈和操作的準確性可以有效減少這種誤差?

3. ?試劑質(zhì)量?:試劑的質(zhì)量不穩(wěn)定或過期也可能影響檢測的準確性。使用高質(zhì)量、在有效期內(nèi)的試劑,并嚴格按照說明書操作可以減少這種影響?。


通過以上方法,可以有效減少免疫組化實驗中的假陽性和假陰性問題,提高實驗結(jié)果的準確性和可靠性。

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