植物类黄酮（Flavonoid）试剂盒说明书
微量法100管/96样
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。
测定原理：
在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在510nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。
自备实验用品及仪器：
天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：60%乙醇，自备。
试剂一：液体1mL×1管，4℃保存。
试剂二：液体1mL×1管，4℃保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
类黄酮提?。?/span>
将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.02g，加入2mL提取液，60℃振荡提取2h，10000g，25℃，离心10min，取上清待测。
测定操作表：
1、 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至510nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
空白管 | 测定管 | |
样本待测液（µL） | 108 | |
蒸馏水（µL） | 108 | |
试剂一（µL） | 6 | 6 |
混匀，25℃静置6min | ||
试剂二（µL） | 6 | 6 |
混匀，25℃静置6min | ||
试剂三（µL） | 80 | 80 |
混匀，25℃静置15 min，测定510nm处吸光值。ΔA=A测定-A空白，空白管只要做一管。 | ||
类黄酮含量计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 5.02x+0.0007，R2 = 0.9996
类黄酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷5.02÷(W÷V样总)= 0.398×（ΔA -0.0007）÷W
V样总：加入提取液体积，2.5mL； V样：反应中样品体积，0.108mL； W：样品质量，g
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 2.51x+0.0007，R2 = 0.9996
类黄酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷2.51÷(W÷V样总)= 0.797×（ΔA -0.0007）÷W
V样总：加入提取液体积，2mL；V样：反应中样品体积，0.108mL；W：样品质量，g
Z低检出限为10µg/g。
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