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血锌浓度检测试剂盒说明书

                                                 微量法100T/96S

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

锌是必需的微量元素之一，在胰岛素和卟啉代谢中也起重要作用。

测定原理：                                                                                                         

在pH 8.5~9.5的溶液中，Zn²⁺与锌试剂生成蓝色配位化合物，在620nm有最大吸收峰。

自备仪器和用品：

离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水和无水乙醇。

试剂组成和配制：

试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前1天配制，加入15mL无水乙醇充分溶解，盖紧，过夜待用。4℃保存可稳定约1个月，如颜色变黄，则已失效。

标准液：液体×1支，10 μ mol/L Zn²⁺标准液。4℃保存。

测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到620 nm，蒸馏水调零。

2. 标准液解冻：提前取出标准液，置于室温下充分解冻后混匀。

3. 空白管：取1.5 mL EP管，依次加入100 μL蒸馏水，100μL试剂一，混匀；室温，13000g，离心10min，小心吸取上清液100 μL，加入0.5 mL EP管，加入100μL试剂二，100μL试剂三，充分混匀后13000g离心取上清，吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板，620 nm测定吸光度，记为A空白管。

4. 标准管：取1.5 mL EP管，依次加入100 μL标准液，100 μL试剂一，混匀；室温，13000g，离心10min，小心吸取上清液100 μL，加入0.5 mL EP管，加入100μL试剂二，100μL试剂三，充分混匀后13000g离心取上清，吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板，620 nm测定吸光度，记为A标准管。

5. 测定管：取1.5 mL EP管，依次加入100 μL血清，200 μL试剂一，混匀；室温，8000g，离心10min，小心吸取上清液100 μL，加入0.5 mL EP管，加入100μL试剂二，100μL试剂三，充分混匀后13000g离心取上清，吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板，620 nm测定吸光度，记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

血锌浓度计算公式：

血锌浓度（μ mol/ L）=C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)

= 10×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)

C标准液：10 μ mol/L Zn²⁺ 

注意事项：

1.        试剂三需提前一天配制，如变黄色则不能再使用。

2.        加入试剂三混匀后，要在30 min内完成该管测定。

3.         Z低检出限为1μ mol/L。

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