土壤植酸酶（phytase）试剂盒说明书
微量法100T/48S
注 意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。
测定原理：
植酸酶在一定温度和pH值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在700nm处有特征吸收峰，根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、酶标仪、96孔板、恒温水浴锅，甲苯（不允许快递）。
试剂的组成和配制：
缓冲液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加缓冲液30mL配制，现用现配；用不完的试剂4℃保存一个月。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。
显色剂：粉剂×6管，4℃避光保存，临用前根据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解，再加1.6mL试剂二混匀。
样本处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定操作表：
对照管 | 测定管 | |
样本（g） | 0.03 | 0.03 |
甲苯 | 20 | 20 |
振荡混匀，室温放置15min | ||
缓冲液（µL） | 500 | |
试剂一（µL） | 500 | |
混匀，37℃孵育24h，10000g，4℃离心5min，取上清 | ||
上清 | 100 | 100 |
显色剂（µL） | 100 | 100 |
混匀，静置15min，测定700nm处吸光值，△A=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。 | ||
酶活性计算公式：
标准曲线：y = 0.8795x + 0.0084，R2 = 0.9977；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值△A。
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每克土样每小时从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/h /g 土样）=（△A-0.0084）÷0.8795×V反总÷W÷T
=0.82×（△A-0.0084）
V反总：反应总体积，0.52mL；T：反应时间，24h；W：样本质量，0.03g。
注意事项：
1、显色剂需要临用前根据用量配制，每一瓶是10个样本的用量，新配制的显色剂若有颜色则已经污染或者试剂过期，应放弃使用。
2、ΔA线性范围为0.01-0.5。
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