土壤硝态氮试剂盒说明书
微量法100T/96S
注 意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中的有机物分解生成铵盐，被氧化后变为硝态氮。土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质。
测定原理：
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。
自备实验用品及仪器：
蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、振荡仪。
试剂组成和配制：
试剂一：粉剂×2支，4℃避光保存。临用前根据用量每支加1mL浓硫酸充分溶解。
试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存。
样本处理：
按照土壤质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g新鲜土样，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，置于振荡仪中振荡提取1h，25℃，10000g离心10min，取上清待测。
测定操作表：
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。
2、 操作表（于EP管中加入下列试剂）
空白管 | 测定管 | |
样本（μL） | 10 | |
蒸馏水（μL） | 10 | |
试剂一（μL） | 20 | 20 |
充分混匀，25℃静置30min | ||
试剂二（μL） | 475 | 475 |
混匀，涡旋振荡，使出现的沉淀充分溶解，转移200uL至微量石英比色皿/96孔板中测定410nm处吸光值A，△A=A测定管-A空白管 | ||
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0156x+0.0073，R2=0.9997
NO3—— N含量（mg/kg鲜重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V样总）
=64.1×（△A-0.0073）÷W
V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0078x+0.0073，R2=0.9997
NO3—— N（mg/kg鲜重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V样总）
=128.2×（△A-0.0073）÷W
V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g
注意事项：
1. 硝酸根不为土壤胶体吸附，且易溶于水，很容易在土壤内部移动，所以测定此指标时应注意采样深度一致。
2. 土壤经风干或者烘干很容易引起NO3—— N的变化，所以最好采用新鲜土壤进行测定，以准确反映该指标含量。
3. 试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。
4. 试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。
5. Z低检出限为100μg/kg。
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