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土壤亮氨酸氨基肽酶(Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP)试剂盒说明书

阅读:494      发布时间:2023-09-25
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土壤亮氨酸氨基肽酶(Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP)试剂盒说明书

                                  微量法100管/48样

 

注   意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:                           

S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶,由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。

 

测定原理:

S-LAP分解L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺,后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。

 

自备用品:

酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿和蒸馏水。

 

试剂的组成和配制:

试剂一:液体35mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;

 

S-LAP测定步骤:

1、   分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至405nm,蒸馏水调零。

2、   在试剂二瓶中加入15mL试剂一充分溶解(如较难溶解,可60℃水浴加热约30min促进溶解);用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

3、   操作表

试剂名称

对照管

测定管

新鲜土样(g)

0.05

0.05

试剂一(μL)

300


试剂二(μL)


300

混匀, 37℃振荡反应1h后,8000g 4℃离心10min,S-LAP活力单位的计算:

取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中,405nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

 

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

单位的定义:每天每g土样每天生成1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

S-LAP(μmol/d /g 土样)=ΔA×V反总÷(ε×d)×106÷W÷T=14.8×ΔA

V反总:反应体系总体积,3×10-4 L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,

 

1cm;T:反应时间,1h=1/24d; W:样本质量,0.05g。

 

b.用96孔板测定的计算公式如下:

单位的定义:每天每g土样每天生成1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

S-LAP(μmol/d /g 土样)=ΔA×V反总÷(ε×d)×106÷W÷T=29.6×ΔA

V反总:反应体系总体积,3×10-4 L;ε:对硝基苯胺摩尔消光系数,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,0.5cm;T:反应时间,1h=1/24d; W:样本质量,0.05g。

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优利科(上海)生命科学有限公司

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