土壤过氧化氢酶（Solid-Catalase，S-CAT）试剂盒说明书
微量法100管/48样
注 意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类，在H2O2清除系统中具有重要作用。
测定原理：
H2O2在240nm下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应S-CAT活性的高低。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸馏水
试剂组成和配制：
试剂一：液体300μL×1瓶，4℃保存；临用前加入29.7mL蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存（如出现结晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）；
试剂三：液体3mL×1瓶，4℃保存。
样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至240nm，蒸馏水调零。
2、 测定前务必准备96孔UV板一块（UV板不是普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板）。
3、 加样表
试剂名称 | 测定管 | 无基质管 | 无土管 |
风干土样（g） | 0.03 | 0.03 | |
试剂一（μL） | 260 | 260 | |
蒸馏水（μL） | 260 |
25℃振荡培养 20min
试剂二（μL） | 10 | 10 | 10 |
混匀8000g，25℃离心5min，取180uL上清
试剂三（μL） | 20 | 20 | 20 |
混匀， 240nm处记录各管吸光值A。
注意：每个测定管要设一个无基质管，无土管只要做一管。
S-CAT活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
单位的定义：每天每g风干土样催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷（ε×d）×106]÷W÷T=16.5×（A无土管-A测定管+A无基质管）
V反总：反应体系总体积，3×10-4 L；ε：过氧化氢摩尔消光系数，4.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； T：反应时间，20 min=1/72d； W：样本质量，0.03g。
b. 用96孔板测定的计算公式如下
单位的定义：每天每g风干土样催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷（ε×d）×106]÷W÷T=33×（A无土管－A测定管+A无基质管）
V反总：反应体系总体积，3×10-4 L；ε：过氧化氢摩尔消光系数，4.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm； T：反应时间，20 min=1/72d； W：样品质量，0.03g。
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