土壤芳基硫酸酯酶（Solid-aryl sulfatase，S-ASF）试剂盒说明书
微量法100管/48样
注 意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
土壤芳基硫酸酯酶来自于土壤微生物，能酶促土壤有机硫化物转化为植物可吸收的无机态硫，在硫素的生物化学循环和植物的硫营养代谢中具有重要的作用，是反映土壤质量的一个重要生物学指标。
测定原理：
S-ASF能够催化对-硝基苯硫酸钾生成对-硝基苯酚，后者在410nm有特征光吸收。
自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存（自备）；
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；临用前加入1.25mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：液体20mL×1瓶，4℃保存；
样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定步骤：
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样（g） | 0.05 | 0.05 |
试剂一（μL） | 12.5 | 12.5 |
振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置15min
试剂二（μL） | 200 | 200 |
试剂三（μL） | 50 | |
蒸馏水（μL） | 50 |
混匀， 37℃水浴1h后
试剂四（μL） | 50 | 50 |
试剂五（μL） | 200 | 200 |
充分混匀，室温静置2min后，10000g 25℃离心10min，取200μL上清液于410nm处测定吸光值A，计算
ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-ASF活力计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0066x -0.013；x为标准品浓度（μmol/L），y为吸光值。
单位的定义：每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-ASF活力（μmol/d /g 土样）＝ (ΔA+0.013) ÷0.0066×V反总÷W÷T =19.09×(ΔA+0.013)
T：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积：2.625×10-4 L；W：样本质量，0.05g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0033x -0.013；x为标准品浓度（μmol/L），y为吸光值。
单位的定义：每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-ASF活力（μmol/d /g 土样）＝ (ΔA+0.013) ÷0.0033×V反总÷W÷T =38.19×(ΔA+0.013)
T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积：2.625×10-4 L；W：样本质量，0.05g。
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