土壤β-木糖苷酶（Solid-β- xylosidase, S-β-XYS）测定试剂盒说明书
微量法100T/48S
注 意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
测定原理：
S-β-XYS催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰，测定405nm光吸收增加速率，可计算S-β-XYS活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体1mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
约0.1g鲜土或风干土样，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，室温振荡提取30min，然后10000g，4℃，离心10min，取上清待测。
测定操作表：
1、 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至405nm。
2、 操作表
对照管 | 测定管 | |
样本（μL） | 40 | 40 |
试剂一（μL） | 10 | |
试剂二（μL） | 80 | 70 |
混匀，45℃水浴20min | ||
试剂三（μL） | 80 | 80 |
混匀，静置5min，405nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。 | ||
β-木糖苷酶活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值ΔA。
酶活定义：每克土样每天催化产生1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土样）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T
=16.33×(ΔA-0.0011)÷W
V样总：加入提取液体积，1mL； V反总：反应总体积，0.12mL；V样：反应中样品体积，0.04mL； W：样品质量，g；T：反应时间，20min=1/72d；
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=6.613x+0.0011，R2=0.9998；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值ΔA
酶活定义：每克土样每天催化产生1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土样）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T
=32.66×(ΔA-0.0011)÷W
V样总：加入提取液体积，1mL； V反总：反应总体积，0.12mL；V样：反应中样品体积，0.04mL； W：样品质量，g；T：反应时间，20min=1/72d；
ΔA控制在0.01-1范围内，若ΔA大于1，可适当减小样本量。
标准曲线线性范围为：0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。
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