水土中总磷酸盐试剂盒说明书
微量法100T/96S
注 意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
总磷酸盐包含正磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、多聚磷酸盐等各种磷酸盐的形式，反应了水土中的磷酸盐水平，是一个水质和土壤质量评价的重要指标。
测定原理：
在酸性溶液中，在分解剂和高温条件下，将无机磷酸盐和有机磷酸盐水解成正磷酸盐，正磷酸盐可与钼酸铵反应成磷钼酸，在还原剂存在时被还原为磷钼蓝，在710nm处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
天平，震荡仪、常温离心机、酶标仪、96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体40mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加4mL蒸馏水充分溶解，然后将试剂五全部加入试 剂四中充分混匀。
试剂五：液体×1支，4℃保存。
样品处理：
1. 水样：按照水样体积（mL）：试剂一体积（mL）：试剂二体积（mL）为10:1:2的比例（建议取1mL水样，加入100μL试剂一和200μL试剂二）95℃沸水浴30min，冷却后待测。
2. 土样：按照土壤质量（g）：蒸馏水体积(mL)：试剂一体积（V）：试剂二体积（V）=1：10:1:2（建议称取约0.1g土样，加入1mL蒸馏水，再加入100μL试剂一和200μL试剂二），95℃沸水浴振荡30min，10000g ，25℃离心10min，取上清液待测。
测定操作表：
空白管 | 测定管 | |
样本（μL） | 40 | |
试剂三（μL） | 40 | 40 |
试剂四（μL） | 40 | 40 |
蒸馏水（μL） | 120 | 80 |
充分混匀，25℃静置10min，于96孔板测定710处吸光值A，分别记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管 | ||
计算公式：
标准曲线：y = 0.0237x + 0.0016，R2 = 0.9989；x为PO4-浓度μg/mL，y为吸光值△A。
1. 水样：
总磷酸盐含量（μg/mL）= (△A-0.0016)÷ 0.0237×V样÷（V样÷V样总）
= 54.8×(△A-0.0016)
2. 土样：
总磷酸盐含量（μg/g）= (△A+0.0063)÷ 0.0489×V样÷（W×V样÷V样总）
=54.8×(△A+0.0063)÷W
V样：加入样本体积；0.04mL；V样总：样本总体积，1.3mL；W，土样质量，g。
注意事项：
1. 配制的试剂四一周内使用完。
2. 检出限为65μg/mL或65μg/g。
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