蔗糖（sucrose）含量试剂盒说明书
微量法100管/96样
注 意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖是植物光合作用的主要产物，也是糖分运输和储藏的主要形式。因此，测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外，蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。
测定原理：
先用碱与样品共热，破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖进一步与间苯二酚反应，生成有色物质，在480nm下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 100ml×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体2ml×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体 20ml×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体 6ml×1瓶，4℃避光保存；
试剂五：粉剂0.5g×1瓶，常温保存。
蔗糖提?。?/span>
称取0.1~0.2g样本，常温研碎，加入0.5mL提取液，适当研磨后快速转移到离心管中，置于80℃水浴锅中10min，振荡3~5次，冷却后，4000g，常温离心10min，取上清，加入2mg试剂五，80℃脱色30min，再加入0.5mL提取液，冷却后，4000g，常温离心10min，取上清液测定。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定，（在EP管中依次加入下列试剂）：
试剂（μL） | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
样本 | 25 | ||
试剂一 | 25 | ||
蒸馏水 | 25 | ||
试剂二 | 15 | 15 | 15 |
混匀，沸水浴煮沸5min左右（盖紧，防止水分散失）
试剂三 | 175 | 175 | 175 |
试剂四 | 50 | 50 | 50 |
混匀，沸水浴30min，冷却后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中测定480nm处光吸收值，空白管、标准管和测定管分别记为A1、A2和A3?？瞻坠芎捅曜脊苤灰鲆还?。
蔗糖含量计算：
1、按照蛋白质含量计算
蔗糖含量(mg/mg prot)=(C标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行测定蛋白浓度。
2、按照样品质量计算
蔗糖含量(mg/g鲜重)=(C标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。
C标准管：标准管浓度，1mg/mL；V1：加入样本体积，0.025mL；V2：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
注意：Z低检测限为100ng/g鲜重或1ng/mg prot
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