植物铵态氮试剂盒说明书
微量法100T/96S
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
氮素是构成生物体的一种必需元素，自然界中的氮素循环包括许多转化作用?？掌械牡还痰⑸锛爸参镉?/span>微生物的共生体固定成氨态氮，经过硝化微生物的作用转化成硝态氮，后者被植物或微生物同化成有机氮化物，植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。
测定原理：
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应， 缩合生成蓝紫色物质，在580nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体9mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1.5mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存。
样本处理：
按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，室温匀浆后于25℃，12000g离心10min，取上清待测。
测定操作表：
空白管 | 测定管 | |
样本（μL） | 60 | |
蒸馏水（μL） | 60 | |
试剂一（μL） | 90 | 90 |
试剂二（μL） | 15 | 15 |
充分混匀，沸水浴5min后自然冷却10min | ||
试剂三（μL） | 150 | 150 |
充分混匀，取200μL于微量石英比色皿/96孔板中测定580nm处吸光值A，△A=A测定管-A空白管 | ||
注意：空白管只需测定一次。
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.1535x-0.0279，R2=0.9993
NH4+—N含量（μg/g 鲜重）=（△A+0.0279）÷ 0.1535×V反总÷（W×V样÷V样总）
= 32.9×（△A+0.0279）÷W
V反总：反应总体积，0.315mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.06mL；V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g
a. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0768x-0.0279，R2=0.9993
NH4+—N含量（μg/g 鲜重）=（△A+0.0279）÷ 0.0768×V反总÷（W×V样÷V样总）
= 65.8×（△A+0.0279）÷W
V反总：反应总体积，0.315mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.06mL；V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g
注意事项：
1. 提取好的待测液尽快测定，低温保存不得超过24小时。
2. 沸水浴时间不宜过长，否则会对测定结果有影响。
3. 显色后20min内完成测定。
4. Z低检出限为18μg/g。
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