BCA法蛋白含量测定试剂盒说明书
微量法100T/96S
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定
测定意义：
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
测定原理：
碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm处吸收峰Z强。
自备仪器和用品：
台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂A：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂B：液体0.5mL×1支，4℃保存。
标准品：液体2mL×1支，4℃保存。
工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2mL），将试剂A和B按照50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。
样品中可溶性蛋白质提取：
1. 液体样品：澄清液体样品可以直接测定。
2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）
冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。
3. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定操作：
1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到562 nm，蒸馏水调零。
2. 工作液置于60℃水浴预热30 min。
空白管 | 标准管 | 测定管 | |
蒸馏水（μL） | 4 | ||
标准品（μL） | 4 | ||
待测液（μL） | 4 | ||
工作液（μL） | 200 | 200 | 200 |
混匀后置于60℃保温30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm处测定吸光值A，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。 | |||
注意：空白管和标准管只需要做一次。
计算公式：
Cpr (mg/mL)= C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）
=0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）
Cpr (mg/g 鲜重)= C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）÷ W
=0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）÷ W
W: 样本质量，g
注意事项：
BCA法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在20-5000μg/ml样品。测定前取1-2个样做预实验，若A测定管－A空白管﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定，以确保测定的准确性。
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