乙酰胆碱转移酶（ChAT）测试盒说明书
一、测定原理：
乙酰胆碱转移酶(choline acetyltransferase ChAT)的测定是以乙酰辅酶 A 和胆碱为底物，在 ChAT 的作用下，反应的生成物和显色剂结合，在 324nm 处测定吸光度，以此计算 ChAT 的活力。
试剂一：液体 6mL×1 瓶，4℃保存。室温低时会有结晶析出，测试前 37℃水浴至澄清。
试剂二：粉剂×1 支，临用前加 220μL 的蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂-20℃以下保存。
试剂三：粉剂×1 支，临用时每支加双蒸水 440μL，用不完的试剂-20℃以下保存。
试剂四：液体×1 支，临用前每支用双蒸水 1:1 稀释，4℃保存。
试剂五：液体×1 支，4℃保存。
试剂六：液体×1 支，4℃保存。试剂七：液体×1 支，4℃保存。
1、样本前处理：
10%匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量（g）：体积(mL)=1：9 的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液，再用生理盐水 2 倍稀释后测定；
测定管 | 对照管 | |
试剂一（μL） | 105 | 105 |
试剂二（μL） | 5 | 5 |
试剂三（μL） | 10 | 10 |
试剂四（μL） | 10 | 10 |
试剂五（μL） | 10 | 10 |
试剂六 (μL) | 10 | 10 |
混匀，37°C 水浴预温 5 分钟 | ||
5%的组织匀浆上清（μL） | 25 | (煮沸的匀浆上清)25 |
混匀，37°C 水浴 20 分钟，100°C 沸水水浴 2 分钟终止反应 | ||
蒸馏水 （μL） | 425 | 425 |
混匀,4000 r/min×10min 离心后取上清进行显色反应 | ||
上清 （μL） | 500 | 500 |
试剂七（μL） | 10 | 10 |
混匀，静置 15 分钟，在 324nm 处，用 1cm 光径，2mm 内径的石英比色皿，蒸馏 水调零，测定各管的吸光度值。 | ||
乙酰胆碱 Ach 是调节食道平滑肌运动的主要的兴奋性神经递质。食道平滑肌收缩主要是由于 Ach 释放引起。而乙酰胆碱转移酶(Choline acetyltransferase ChAT)和乙酰胆碱脂酶(Acetylcholinesterase ACHE)分别是
Ach 的合成酶和水解酶，调节 Ach 的代谢。食道组织中这两个酶的活力代表了食管内源性胆碱能神经功能状态。
乙酰胆碱是延髓脊髓运动神经元，自主神经系统神经节前纤维，神经节后胆碱能(副交感神经)纤维，以 及中枢神经系统内许多神经元(例如基底节，大脑运动区皮层)的主要神经递质。它是通过胆碱乙酰转移酶的 作用，由胆碱与来自线粒体的乙酰辅酶 A 所合成。在获得释放后，乙酰胆碱刺激特殊的胆碱能受体，这种相互作用很快被局部的胆碱酯酶所终止，后者使乙酰胆碱被水解为胆碱与乙酸盐。乙酰胆碱的水平由胆碱乙 酰转移酶和胆碱的摄取所调控。
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