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從四個方面探討熒光素酶發(fā)光成像技術(shù)的具體內(nèi)容
閱讀：854 發(fā)布時間：2023-3-20
熒光素酶發(fā)光成像是一種廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究的成像技術(shù)，其具有較高的靈敏度和選擇性，能夠在活體內(nèi)、細胞內(nèi)以及分子水平上實現(xiàn)可視化成像。本文將從作用、原理、特點以及選型標準四個方面探討熒光素酶發(fā)光成像技術(shù)的具體內(nèi)容。
一、作用
熒光素酶（Luciferase）是一種廣泛存在于生物界的酶類，在一些動物中起到生物熒光作用，熒光素酶發(fā)光成像技術(shù)利用熒光素酶與熒光素底物（Luciferin）的反應(yīng)，產(chǎn)生強烈的熒光信號，以實現(xiàn)對目標區(qū)域的定量及定位等高分辨率成像。
二、原理
熒光素酶的反應(yīng)原理是熒光素底物與ATP在熒光素酶的催化下進行氧化反應(yīng)，生成二氧化碳、AMP和氧化熒光素，并釋放出能量。氧化熒光素激發(fā)的熒光光子可以經(jīng)過吸收器淬滅，也可以導(dǎo)致染料重新激發(fā)和發(fā)光，之后通過成像設(shè)備記錄下來。
三、特點
1、靈敏度
熒光素酶發(fā)光成像具有較高的檢測靈敏度，其能夠偵測到相對較弱的熒光發(fā)光，能夠提供高分辨率的熒光圖像。
2、高度選擇性
熒光素酶發(fā)光成像對絕大多數(shù)背景熒光有很好的區(qū)分度，使其可以獲得非常高的檢測信噪比。
3、實時性高
熒光素酶發(fā)光成像能夠以非常高的速度捕捉熒光事件，從而使熒光素酶標記物的變化能夠?qū)崟r呈現(xiàn)在屏幕上。
四、選型標準
在使用熒光素酶發(fā)光成像技術(shù)時，應(yīng)根據(jù)實驗需求選擇合適的熒光素酶種類和底物。
1、熒光素酶種類選擇
熒光素酶有多種不同的種類，應(yīng)根據(jù)實驗?zāi)康暮蜆颖绢愋瓦x擇合適的熒光素酶。例如，F(xiàn)irefly熒光素酶對哺乳動物細胞較為適用，但對歐文斯毒蛇等其它生物的檢測靈敏度較低。因此，在選擇熒光素酶種類時，應(yīng)根據(jù)實驗需求和樣本類型選擇合適的種類。
2、熒光素底物的選擇
熒光素底物分為自發(fā)熒光和非自發(fā)熒光兩種，應(yīng)根據(jù)實驗需求選擇合適的熒光素底物。自發(fā)熒光底物能夠極大提高檢測的靈敏度，但在嵌合蛋白的檢測中，熒光素底物的自發(fā)熒光會對測量的結(jié)果產(chǎn)生影響，因此應(yīng)選擇非自發(fā)熒光底物。