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離心濃縮儀在DNA/RNA濃縮中的應(yīng)用

閱讀:81      發(fā)布時(shí)間:2025-6-6
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離心濃縮儀在DNA/RNA濃縮中展現(xiàn)出顯著的技術(shù)優(yōu)勢(shì),成為分子生物學(xué)研究的關(guān)鍵工具。該設(shè)備通過(guò)真空負(fù)壓(50-100 mbar)降低溶劑沸點(diǎn),配合溫和加熱(30-40℃)和離心力(1000-1500 rpm)三重作用,可在30-60分鐘內(nèi)高效濃縮微量核酸樣品(50μL→5μL),同時(shí)保持DNA/RNA完整性(回收率≥95%)。其封閉式設(shè)計(jì)有效防止氣溶膠污染,支持96孔板高通量操作,顯著優(yōu)于傳統(tǒng)乙醇沉淀法(節(jié)省60%時(shí)間且避免鹽分殘留)。典型應(yīng)用于NGS文庫(kù)構(gòu)建、PCR產(chǎn)物純化等場(chǎng)景,尤其適合珍貴樣本處理,如單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序中的cDNA濃縮。部分機(jī)型還集成冷凝捕集功能,實(shí)現(xiàn)有機(jī)溶劑安全回收,滿(mǎn)足GLP實(shí)驗(yàn)室規(guī)范要求。

離心濃縮儀在DNA/RNA濃縮中的應(yīng)用

離心濃縮儀憑借其溫和高效的特性,已成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中核酸(DNA/RNA)濃縮純化的關(guān)鍵設(shè)備,其應(yīng)用優(yōu)勢(shì)及技術(shù)要點(diǎn)如下:

1、活性保護(hù)

• 低溫(30-40℃)真空濃縮,避免核酸高溫變性(如DNA斷裂或RNA降解);

• 對(duì)比傳統(tǒng)乙醇沉淀法,回收率提升20%以上(文獻(xiàn)數(shù)據(jù));

2、高通量處理

• 單次可并行處理48-180個(gè)微量樣本(適配1.5mL離心管);

• 自動(dòng)化程序?qū)崿F(xiàn)無(wú)人值守,節(jié)省60%操作時(shí)間;

3、兼容性廣

• 適用于各類(lèi)提取緩沖液(TE buffer、Tris-HCl等)及有機(jī)溶劑(異丙醇、乙醇);

• 可濃縮pg級(jí)至μg級(jí)核酸,滿(mǎn)足NGS、PCR等下游實(shí)驗(yàn)需求;

離心濃縮儀在DNA/RNA濃縮中的應(yīng)用

以DNA濃縮為例,離心濃縮儀操作主要步驟如下:

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1、設(shè)備與耗材

○離心濃縮儀(預(yù)冷至4℃)

○1.5/2.0 mL耐有機(jī)溶劑離心管(推薦RNase/DNase-free)

○真空泵油(確保液位達(dá)標(biāo))

○冷阱

2、樣品預(yù)處理

○檢測(cè)DNA初始濃度(Nanodrop A260/A280應(yīng)為1.8-2.0)

○若含高鹽(如NaCl>200 mM),用TE buffer稀釋10倍

二、分裝與裝載

1、分裝樣品

將DNA溶液(≤1.5 mL/管)對(duì)稱(chēng)裝入離心轉(zhuǎn)子,平衡誤1差<0.1 g。

2、參數(shù)設(shè)置

離心濃縮儀在DNA/RNA濃縮中的應(yīng)用

三、濃縮過(guò)程監(jiān)控

1、實(shí)時(shí)觀察

通過(guò)觀察窗確認(rèn)無(wú)液體飛濺(若發(fā)生,立即暫停并檢查平衡),冷凝管結(jié)霜量>50%需暫停除霜。

2、終點(diǎn)判斷

自動(dòng)模式:儀器檢測(cè)到真空度穩(wěn)定(ΔP<5 mbar/5min)

手動(dòng)模式:目測(cè)管底出現(xiàn)1-2 μL液滴

四、終止與回收

1、停機(jī)步驟

先關(guān)閉加熱模塊,再緩慢泄真空(速率≤10 mbar/s),最后停止離心。

2、樣品處理

立即用20 μL TE buffer重懸DNA(輕柔吹吸10次),短暫離心(1000g×30s)收集管壁殘留。

五、質(zhì)量控制

1、濃度檢測(cè)

Qubit定量(比Nanodrop更準(zhǔn)確)

瓊脂糖凝膠電泳(驗(yàn)證無(wú)降解)

2、設(shè)備維護(hù)

用10%乙醇擦拭轉(zhuǎn)子及腔體

真空泵油變色(>200小時(shí))需更換


離心濃縮儀在DNA/RNA濃縮中的應(yīng)用

富睿捷真空離心濃縮設(shè)備可同時(shí)處理多個(gè)樣品,無(wú)需擔(dān)心交叉污染。系統(tǒng)內(nèi)程序可設(shè)定至多30個(gè),主機(jī)配備樣品在線(xiàn)成像系統(tǒng),可在運(yùn)行過(guò)程中觀察樣品濃縮狀態(tài),并根據(jù)不同的樣品對(duì)整機(jī)的真空度進(jìn)行調(diào)節(jié)。設(shè)備采用皮拉尼真空計(jì)可實(shí)時(shí)顯示腔體內(nèi)的真空度,并保證真空度的真實(shí)性。根據(jù)不同的樣品可對(duì)整機(jī)轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)節(jié)。


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