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實時熒光定量PCR的優(yōu)化(四)2021/10/12
這期我們來學(xué)習(xí)設(shè)計TaqMan探針,應(yīng)該考慮的因素有以下這些......1、TaqMan探針的最佳長度在20bp,不超過30bp,這樣才能實現(xiàn)熒光淬滅。有些情況下超過30bp也是可以的,需要將淬滅基團...
實時熒光定量PCR的優(yōu)化(三)2021/10/12
本期介紹設(shè)計引物,得到實時熒光PCR引物對,這種方法也可以用于普通PCR。1、長度應(yīng)該在18~30bp,保證結(jié)合的特異性。2、熔解溫度(Tm值)應(yīng)在55~60°C,兩條引物的Tm值應(yīng)相差2~3°C。3...
實時熒光定量PCR的優(yōu)化(二)2021/10/12
如果你所研究的靶序列有前人建立過實時熒光定量PCR的方法,就可以在公共數(shù)據(jù)庫中查找,查看擴增效率、特異性、靈敏度等信息,省去從頭開始的時間。注意,使用前人建立的方法前,需要再次驗證這個方法的參數(shù)是不是...
實時熒光定量PCR的優(yōu)化(一)2021/10/12
如果是病毒定量和SNP基因分型的實時熒光定量PCR,我們需要盡可能高特異性;如果是病原體、mRNA檢測,我們需要高靈敏度。想要提高PCR擴增效率、特異性及靈敏度,我們可以通過一系列措施優(yōu)化實時熒光定量...
qPCR實驗為什么要制作熔解曲線?2021/10/11
熒光DNA結(jié)合染料法的缺點是它們能在反應(yīng)中結(jié)合所有DNA雙鏈,包括在實時熒光PCR中產(chǎn)生的引物二聚體,和其他非特異性產(chǎn)物,引起大量的背景噪聲信號。這種噪聲會影響我們對靶基因產(chǎn)量的評估,甚至熒光強度和靶...
經(jīng)濟快捷的SNP位點研究方法-SNP基因分型2021/10/11
SNP,全稱SingleNucleotidePolymorphisms,是指在基因組上單個核苷酸的變異。目前很多人仍然使用測序法來進行研究,具有準確、直觀的優(yōu)點。但有一種方法,能間接的研究SNP,且經(jīng)...
生化轉(zhuǎn)染的另一種選擇,磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染2021/10/11
磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法應(yīng)用于將外源DNA轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的細胞,已有45年以上的歷史。Graham和vanderEb在磷酸鈣存在下,將病毒DNA導(dǎo)入哺乳動物細胞的這一工作,為基因在多種哺乳動物細胞中進行瞬時表達...
共轉(zhuǎn)化,篩選轉(zhuǎn)染細胞的實用工具2021/10/11
想要達到轉(zhuǎn)染的目的,即分析轉(zhuǎn)染基因的功能和表達,需要轉(zhuǎn)染的基因穩(wěn)定整合進入宿主染色體。根據(jù)細胞類型,細胞群體中,最高有80%的細胞,以瞬時表達的方式表達轉(zhuǎn)染的基因。但對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,好的情況,也只有1/...
如何提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染的效率?2021/10/11
提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染法效率的共通步驟,目的都是為了避免產(chǎn)生會被細胞內(nèi)吞、加工失效的大顆粒沉淀。提高轉(zhuǎn)染效率的操作有以下這些:1、將小分子DNA整合在高分子質(zhì)量基因組DNA上,以大分子作為運載體,能提高轉(zhuǎn)染效...
怎么提高電穿孔法轉(zhuǎn)染的效率?2021/10/9
電穿孔法難點在于提高電穿孔的效率。實驗操作者一般能從電轉(zhuǎn)儀廠家得到轉(zhuǎn)染的詳細方案和優(yōu)化指導(dǎo)。當(dāng)你需要自己優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率時,可以從以下方面進行:1、外加電場的強度:電壓過低,細胞膜不能形成小孔,使得外源分...
電穿孔法轉(zhuǎn)染如此“萬能”,為什么還要用其他方法?2021/10/9
同學(xué)們在進行轉(zhuǎn)染時,肯定被各種各樣的轉(zhuǎn)染試劑挑花了眼吧。商業(yè)化的轉(zhuǎn)染試劑通常針對多重細胞類型、不同的核酸和各種特定的用途,也就是說,你要從種類繁多的試劑中挑選適合你的。這時候,電穿孔法轉(zhuǎn)染就進入了我們...
我的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實驗效率低,怎么辦?2021/10/9
脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染實驗指的是,脂質(zhì)包裹待轉(zhuǎn)染DNA形成復(fù)合體,與細胞膜融合或內(nèi)吞,進入細胞。然而,大量的脂質(zhì)體-DNA復(fù)合體,只有一小部分能運送到細胞質(zhì)并進入細胞核中。如何提高脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵,就...
脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染為什么是首先選的轉(zhuǎn)染方法?2021/10/9
在細胞轉(zhuǎn)染實驗中,我們常常要根據(jù)不同的實驗?zāi)康?,轉(zhuǎn)染細胞的不同,選擇我們將要使用的實驗方法。脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染是我們的首先選擇,他具有易操作,重復(fù)性好,低毒性和適用于懸浮培養(yǎng)體系細胞的特點,在很多轉(zhuǎn)染方...
常用的卵巢癌細胞的培養(yǎng)及細胞表達2021/10/9
整理一篇關(guān)于卵巢癌細胞的培養(yǎng)方法和細胞的特征特點,由于卵巢癌早期缺少癥狀,即使有癥狀也不特異,篩查的作用又有限,因此早期診斷比較困難,就診時60%~70%已為晚期,而晚期病例又療效不佳,卵巢癌方向的研...
CCK-8,細胞增殖檢測較為合適的選擇2021/10/8
什么是細胞增殖檢測?細胞增殖是細胞在周期調(diào)控的因子下,通過DNA復(fù)制等反應(yīng),完成細胞分裂的過程。在細胞增殖中,新細胞的產(chǎn)生過程影響著體內(nèi)所有組織的發(fā)育、生長和維持,同時,它也被嚴格調(diào)控著,以防失控的細...

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