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深圳市安培生物科技有限公司
中級會(huì)員 | 第5年

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U937細(xì)胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享

時(shí)間:2021/8/23閱讀:1713
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一、轉(zhuǎn)染材料準(zhǔn)備

1. 轉(zhuǎn)染試劑用量:10ul

2. DNA/siRNA濃度:電訊

3. 細(xì)胞密度:1*106-1*105

4. 轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板:6孔板

5. 轉(zhuǎn)染試劑:zeta life ,Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑;貨號:AD600025

6. 轉(zhuǎn)染時(shí)間:15小時(shí)

7. 細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清:Z7181FBS-500胎牛血清

8. 細(xì)胞凍存液:L0100無血清細(xì)胞凍存液
注意:本細(xì)胞轉(zhuǎn)染用量條件不適合lipo使用。

U937細(xì)胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享

U937細(xì)胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享

操作過程:

1.提前1天接種細(xì)胞:細(xì)胞匯合度在60-80%左右,再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2. 核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照比例關(guān)系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。

3.在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。

4.細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染24小時(shí)后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

5.分析結(jié)果:質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48-72小時(shí)后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96小時(shí)檢測mRNA或蛋白表達(dá)。若進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA轉(zhuǎn)染后9小時(shí)熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72小時(shí)檢測mRNA或蛋白表達(dá)。


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