對(duì)于外泌體（Exosome）的表征，大家最為關(guān)注的想必都是它的粒徑了，但其實(shí)外泌體的濃度參數(shù)也同樣重要，因?yàn)闈舛炔煌?，外泌體樣品最終表現(xiàn)出的具體功效和能力都會(huì)有不小的差別。濃度過(guò)高，與目標(biāo)接觸不充分導(dǎo)致浪費(fèi)，濃度過(guò)低則效率不足，在加上濃度可能會(huì)引起一些其他的生理變化，所以外泌體的濃度檢測(cè)實(shí)際上是非常必要的。
目前市場(chǎng)上的儀器像納米粒子示蹤(NTA)，納米流式（NanoFCM),納米庫(kù)爾特粒度儀（Nanocoulter）等都可以用于粒徑和濃度的表征，動(dòng)態(tài)光散射（DLS）因?yàn)樵淼南拗浦荒苡糜诹降臏y(cè)量。
最近筆者對(duì)幾個(gè)外泌體樣品用Nanocoulter（納米庫(kù)爾特粒度儀）進(jìn)行了濃度線性的測(cè)試，結(jié)果讓人有些意外。
把1號(hào)外泌體樣品分別做10倍和2倍的5個(gè)濃度梯度，然后用納米庫(kù)爾特粒度儀（Nanocoulter）進(jìn)行測(cè)試，統(tǒng)合數(shù)據(jù)后繪圖觀察，根據(jù)最后的結(jié)果來(lái)看，線性是非常好的。
圖1：1號(hào)外泌體10倍線性圖 圖2：2號(hào)外泌體2倍線性圖
不過(guò)在測(cè)試2號(hào)外泌體樣品的時(shí)候出現(xiàn)了意外情況，如圖3所示，在1萬(wàn)倍之后線性非常差，甚至趨于平直，筆者在這之后重復(fù)測(cè)試多次，發(fā)現(xiàn)在1萬(wàn)倍之前的線性都比較好，但稀釋倍數(shù)超過(guò)1萬(wàn)后就都是一樣的結(jié)果，此時(shí)問(wèn)題已經(jīng)基本上可以確定，理應(yīng)是在某個(gè)環(huán)節(jié)引入了外源污染。
圖3：3號(hào)外泌體10倍線性圖
經(jīng)過(guò)排查驗(yàn)證，最終發(fā)現(xiàn)污染源頭為稀釋樣品所使用的稀釋液，于是筆者將稀釋液進(jìn)行測(cè)試（圖4），數(shù)次測(cè)試結(jié)果都極為接近，最終平均的外源顆粒濃度在5.00E+09(Particles/mL)，該濃度與2號(hào)樣品稀釋超過(guò)1萬(wàn)倍后檢測(cè)到的濃度比較接近。
圖4：污染源測(cè)試圖
確定了污染源和污染顆粒的濃度，在原來(lái)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上將該外源顆粒的濃度減去后重新繪圖（圖5），發(fā)現(xiàn)2號(hào)外泌體的數(shù)據(jù)線性其實(shí)很好。
圖5：3號(hào)外泌體去污染10倍線性圖
總結(jié)：納米庫(kù)爾特粒度儀在外泌體濃度檢測(cè)方面擁有非常高的精度和很寬的檢測(cè)范圍，數(shù)據(jù)精準(zhǔn)，線性良好，通過(guò)線性測(cè)試還可以發(fā)現(xiàn)外泌體是否存在外源污染的問(wèn)題，為相關(guān)的科研工作提供便利，是外泌體表征分析的一大利器。
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