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一、大鼠牙乳头细胞简介：牙乳头细胞来源于外胚间充质，具有多向分化潜能，是体内分化为成牙本质细胞的前体细胞，该细胞在牙发育和牙体牙髓损伤修复过程中起重要作用

一、大鼠牙乳头细胞简介：

牙乳头细胞来源于外胚间充质，具有多向分化潜能，是体内分化为成牙本质细胞的前体细胞，该细胞在牙发育和牙体牙髓损伤修复过程中起重要作用。牙乳头细胞为未分化的间充质细胞，有少量微细的胶原纤维分散在细胞外间隙。在钟状期，被成釉器凹陷部包围的外胚间叶组织增多，并出现细胞的分化。在内釉上皮的诱导下，牙乳头外层细胞分化为高柱状的成牙本质细胞。这些细胞在切缘或牙尖部为柱状，在牙颈部细胞尚未分化成熟，为立方状。
本公司生产的大鼠牙乳头成纤维细胞采用酶解法制备而来，细胞总量约为5×10⁵/T25方瓶，波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色呈阳性，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
二、使用方法

1 、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中静置 2-3 小时，以稳定细胞状态，然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的培养液（备注：先使用瓶子中培养液培养及尽快冻存保种细胞，保存种子后再尝试自己完全培养液培养观察是否适合此细胞生长，以免使用自己培养液不适合细胞生长造成细胞状态不好或死亡） ，最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。
2 、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 10ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃ ,5%CO2 细胞培养箱中培养；
4）待细胞贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3 、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）用适当量的冻存液（培养液： FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期储存（或者按照梯度程序降温模式直接放置-80 度冻存后并转移液氮中长期储存）。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞转移至含 5ml 培养液无菌离心管中，1000rpm 离心 5min ，然后加入 5ml 完全培养液混匀细胞，将细胞悬液转移至 T25 培养瓶中，放置于 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中培养；
3）第二天，换用新鲜培养基继续培养。

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