豬骨髓間充質干細胞（原代）簡介：  

骨髓間充質干細胞是干細胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層。骨髓間充質干細胞最初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調控和自我復制等特點而日益受到人們的關注。如間充質干細胞在體內或體外特定的誘導條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、心肌、內皮等多種組織細胞，連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復。  

本公司生產(chǎn)的豬骨髓間充質干細胞采用密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×105/T25方瓶，CD29、CD44呈陽性；CD45、CD90呈陰性，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。  

豬骨髓間充質干細胞（原代）使用方法：    

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：  

取出T25方瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的培養(yǎng)液（備注：先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞，保存種子后再嘗試自己培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡），最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng)。  

2、細胞傳代：  

1細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時，棄T25方瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞3次；  

2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm/min，離心5min；  

3棄上清，沉淀細胞用10ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；  

4待細胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。  

3、細胞凍存：  

1細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的90%面積時，棄T25方瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞3次；  

2添加0.25%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中37度培養(yǎng)箱放置3-5分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm/min，離心5min；  

3用適當量的凍存液（培養(yǎng)液：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；  

4先將細胞凍存管放置于-20℃1h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80度凍存后并轉移液氮中長期儲存）。  

4、細胞復蘇：  

1從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；  

2將凍存管中的細胞轉移至含5ml培養(yǎng)液無菌離心管中，1000rpm離心5min，然后加入5ml培養(yǎng)液混勻細胞，將細胞懸液轉移至T25培養(yǎng)瓶中，放置于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；  

3第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。