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3T6-Swiss albino小鼠胚胎成纤维细胞系

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二、细胞培养操作说明

1.细胞培养需要充足经验，新手或者没有类似细胞培养经验的人建议在专业人士指导下进行操作，尤其注意无菌操作、贴壁细胞消化时间及细胞培养密度。

2.部分细胞在传代后时，会有以下现象：细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞。以上都是细胞培养常见现象，不影响细胞增殖和实验。

3.细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡、细胞器折光或者细胞膜表面物质，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，具体情况可以参考ATCC、DSMZ等大型细胞库细胞照片。细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片，可以吸走培养基后用PBS润洗；润洗不能清除的可以消化细胞重新接种，消化完成后加*培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。再加5ml PBS重悬细胞，再离心后，用*培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。

4.不同品牌胰M溶液成分不一样，消化活性差别比较大，更换胰M品牌时需重新摸索消化时间，以消化到细胞间隙变大但未漂浮为准，此时结束消化最佳，避免消化过度导致细胞死亡。细胞消化后比较脆弱，吹打力度不要过大，不要产生过多气泡，否则会严重影响细胞状态。

5.不同细胞生长速度差异较大，所有细胞收货后第①次传代建议按1:2传代。正常培养时生长较慢、密度较低的细胞需要传代时按1:2传代，生长较快、密度较高的细胞可以按1:4传代。

6.细胞生长偏慢时，可以将血清浓度增加到15-20%培养一段时间，待细胞状态和生长速度恢复正常后换回10%血清。