判斷血清質(zhì)量的4種技巧

時(shí)間：2023/7/3閱讀：1078

第一種：接種率測試

進(jìn)行接種率測試可以優(yōu)化出一個(gè)最合適的血清使用濃度?？梢?/span>把新到批次的血清按不同的濃度比例配制成血清細(xì)胞培養(yǎng)基，例如5%、10%、15%和20%濃度的血清細(xì)胞培養(yǎng)基。然后以10-100個(gè)細(xì)胞/mL的濃度進(jìn)行接種，并分別使用上述不同血清濃度的血清細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)2周，觀察細(xì)胞的不同濃度下的細(xì)胞存活率以及細(xì)胞集落的面積變化，從而得出一個(gè)最合適的血清濃度。

血清.png

例如，10%和15%的結(jié)果都可以接受的話，則應(yīng)使用10%進(jìn)行培養(yǎng)，一方面可以節(jié)省血清使用，其次也可以降低血清存在時(shí)對(duì)細(xì)胞生長產(chǎn)生的其他不可控影響因素。

第二種：生長曲線

從生長曲線可以判斷不同批次間的血清對(duì)細(xì)胞生長的影響。以正常培養(yǎng)的濃度進(jìn)行細(xì)胞接種，并觀察記錄細(xì)胞達(dá)到不同的密度所需要用到的時(shí)間。

血清1.png

例如，如果細(xì)胞使用這一批次的血清時(shí)，其生長停滯期的時(shí)間較長，說明細(xì)胞需要對(duì)這個(gè)批次的血清進(jìn)行較長時(shí)間的適應(yīng)后才能正常生長；如果細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)增長期后，倍增速度快，也就是長得很快，說明這批次的血清對(duì)細(xì)胞的生長促進(jìn)效果很明顯；如果細(xì)胞進(jìn)入平臺(tái)期后，其密度比以往的血清批次要更高，說明該批次的血清的經(jīng)濟(jì)效率更高，反之亦然。

可以直接用MTT繪制細(xì)胞的生長曲線，也可以用可連續(xù)觀察的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀或觀測系統(tǒng)。

第三種：細(xì)胞特征觀察

細(xì)胞特征觀察用于判斷該血清是否會(huì)存在一些影響因子，對(duì)細(xì)胞的基因表達(dá)產(chǎn)生影響。

這個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)藥物篩選、需要細(xì)胞定向分化或分泌物進(jìn)行的項(xiàng)目非常有必要。

觀察細(xì)胞特征，除了要對(duì)細(xì)胞的形態(tài)特征進(jìn)行判斷，還需要從分子和蛋白水平去檢測對(duì)比。

例如在正常培養(yǎng)階段，提取細(xì)胞RNA進(jìn)行待研究的基因的表達(dá)分析，看看血清是否會(huì)對(duì)該基因的表達(dá)產(chǎn)生上調(diào)或抑制，如果有，那說明該血清的存在可能會(huì)影響你的課題實(shí)驗(yàn)的結(jié)果準(zhǔn)確性。

第四種：血清污染物的檢測

通常商業(yè)化的血清出廠前都會(huì)進(jìn)行嚴(yán)格的微生物清除，但仍有極少數(shù)可能有部分的血清會(huì)存在支原體的污染，或在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血清分裝時(shí)帶入了微生物的污染。

因此，我建議，有條件的同學(xué)在使用血清前，應(yīng)該先取一點(diǎn)血清或已配制完成的血清細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行空白培養(yǎng)，觀察其是否存在細(xì)菌、真菌等微生物的污染，確認(rèn)沒有問題后再進(jìn)行正式的細(xì)胞培養(yǎng)。

血清2.png

而支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)，則只能通過PCR、熒光染色等進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測了。

這里還需要特別強(qiáng)調(diào)的一點(diǎn)是，有的同學(xué)會(huì)通過看血清的顏色是否紅、橙紅來判斷血清質(zhì)量，這是玄學(xué)，沒有科學(xué)依據(jù)。

血清的顏色如果較紅，代表其在采集過程中，動(dòng)物出現(xiàn)了一定程度的溶血，這和采集工藝有關(guān)，和血清本身質(zhì)量無關(guān)。

另外，血清解凍后，有時(shí)會(huì)看到有一些絮狀物，這種絮狀物也不一定是微生物污染，有可能是血清內(nèi)的蛋白質(zhì)凝集而成的。

它的存在可能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生刺激，不利于細(xì)胞生長，但血清還是可以用的，這些絮狀物體積大無法通過過濾去除，我們可以嘗試離心完成清除后繼續(xù)使用該瓶血清。

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