配對抗體的制備與篩選

時間：2022/2/17閱讀：1992

配對抗體指的是可以同時結(jié)合在一個抗原分子上的兩個抗體。配對抗體，一般應(yīng)用于雙抗夾心法 ELISA 實驗。

抗體配對的原理

通常情況下，一個抗原分子擁有多個抗原決定簇，將抗原注射入動物體內(nèi)進(jìn)行免疫，針對不同的抗原決定簇會產(chǎn)生不同的抗體。產(chǎn)生的抗體具有特異性與專一性，即一個抗體分子只會特異性地結(jié)合一個抗原決定簇。兩個針對不同抗原決定簇的抗體，有可能同時結(jié)合到抗原分子上。如果兩個抗體同時結(jié)合到同一個抗原分子上，那么這兩個抗體就是配對抗體。

配對抗體的制備與篩選

需要注意的是，即使兩個抗體針對的是不同的抗原決定簇，也并不意味著這兩個抗體分子一定可以同時與抗原分子結(jié)合。當(dāng)一個抗體與抗原結(jié)合后，有可能會導(dǎo)致其他結(jié)合位點(diǎn)（抗原決定簇）構(gòu)型的改變，從而導(dǎo)致其他的抗體無法正常結(jié)合到抗原上。位阻效應(yīng)的存在，也可能使兩個結(jié)合位點(diǎn)距離較近的抗體無法同時結(jié)合在抗原上。因此想要得到可以同時結(jié)合在抗原分子上的配對抗體，在制備出抗體后，還需要對得到的抗體進(jìn)行篩選。這就意味著，要制備配對抗體，要完成以下兩步工作：抗體的制備；配對抗體的篩選。

抗體制備

為了便于后續(xù)的篩選，制備的抗體應(yīng)為單克隆抗體，通常利用雜交瘤技術(shù)進(jìn)行單克隆抗體的制備。注意：如果單克隆抗體很少，很可能會找不到可以配對的抗體，因此，在免疫動物的時候，應(yīng)多免疫幾只動物，以獲得更多的單克隆抗體。

配對抗體的篩選

通常，配對抗體篩選的方法是雙抗夾心 ELISA 法。篩選的原理為：在得到了單克隆抗體后，從中取出兩種單克隆抗體，一種作為捕獲抗體，另一種作為標(biāo)記抗體（HRP 酶標(biāo)記），將捕獲抗體包被在抗原板上，先加入抗原，孵育后洗去未結(jié)合的抗原，再加入標(biāo)記抗體孵育后洗去未結(jié)合的標(biāo)記抗體，最后加入顯色液顯色。如果可以顯色，說明標(biāo)記抗體與抗原特異性結(jié)合，該捕獲抗體與標(biāo)記抗體為一對配對抗體。如果不能顯色，說明標(biāo)記抗體不能與抗原結(jié)合，從而被洗脫，該捕獲抗體與標(biāo)記抗體不是配對抗體。如果選擇的兩種單克隆抗體不能進(jìn)行配對，則需重新選擇兩種單抗，重新進(jìn)行試驗，直至找出可以配對的抗體。

配對抗體的應(yīng)用

利用雙抗夾心法對目的抗原進(jìn)行定性定量的檢測，必須要用到可以同時與目的抗原結(jié)合的配對抗體。對于比較常見的目的抗原，可以通過購買試劑盒的方式得到相應(yīng)配對抗體。但是市面上試劑盒的種類有限，有些目的蛋白在市面上無法買到對應(yīng)的試劑盒，為了進(jìn)行雙抗夾心法 ELISA 實驗，需進(jìn)行相應(yīng)的配對抗體的生產(chǎn)。

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配對抗體的制備與篩選

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