化工仪器网
详细介绍
产品简介
Origami 2 系列菌株是由 K-12 菌株衍生而来，在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase
(gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效地表达含二硫键的蛋白。与 Origami 系列菌
株相比，Origami 2 对卡那抗生素敏感，因而能够用于含卡纳抗性质粒的转化。该菌株携带的 gor
基因突变使得其和原来的 Origami(DE3)菌株一样具有四环素抗性。该菌株含有溶源的 λDE3 序
列，可表达 T7 RNA 聚合酶，因而适用于 pET 系列及其他 T7 启动子系列载体。该菌株含有的
pLysS 质粒（氯m素抗性）能够产生 T7 溶菌m，可以有效降低目的蛋白的本底表达水平。pLysS
质粒的起始复制位点是 p15 Origin, 这使得该质粒能和 pUC-及 pBR322-的衍生质粒共存。经 pUC18
质粒转化检测，Origami 2 (DE3)pLysS 感受态细胞的转化效率可达 107 cfu/μg DNA 以上。
产品组成
组分
Origami 2 (DE3)pLysS
感受态细胞
10 × 100μL
100 × 100μL
定制
基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F ’ [lac+ lacIq pro] (DE3) gor522::Tn10
trxB pLysS (CamR, StrR, TetR)
存储条件
-80 ℃保存，请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除 pLysS 质粒外，无外源质粒 DNA 残留；
化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min；
4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；
5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。
注意事项
1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；
3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；
4. 为确保优良转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。
化工仪器网