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详细介绍
产品简介
Rosetta 系列菌株来源于 BL21 系列宿主菌，该系列菌株含有原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码
子，增加了真核细胞的蛋白表达水平。Rosetta(DE3)pLysS 来源于 Rosetta(DE3)，菌株能够提供
AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 稀有密码子的 tRNA。Rosetta(DE3)pLysS 载体通过提供稀有
密码子，使得该宿主菌相对于其他大肠杆菌，能够提供更加“通用"的蛋白质表达，从而提升目的蛋
白表达水平。DE3 是溶源性的 λDE3, 所以带有 T7 RNA 聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于 pET 系
列载体，及其他 T7 启动子系列载体。含有 pLysSRARE2 质粒，能够产生 T7 溶菌m，可以有效降低
目的基因的基础表达水平，该质粒具有氯m素抗性。pLysSRARE2质粒的起始复制位点是p15 Origin,
这使得该质粒能够和 pUC-及 pBR322-衍生的质?；ハ喙泊?。经 pUC18 质粒转化检测，
Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞的转化效率可达 107 cfu/μg DNA 以上。
产品组成
组分
Rosetta(DE3)pLysS
化学感受态细胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3) pLysSRARE2 (CamR)
存储条件
-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除 pLysSRARE2 外，无外源质粒 DNA 残留；
化学法转化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90 s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min；
4. 向离心管中加入900 μL LB或SOC培养基（室温或37 ℃预热），然后置于37 ℃摇床复壮45 min；
5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。
注意事项
1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；
3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；
4. 为确保优良转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。
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