ATCC15834 Electro：                                                   50μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl )：                 10μl

保存条件(保质期)：                                          -80℃（12个月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes pRi15834 (agropine type)

产品说明

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。ATCC15834发根农杆菌菌株来源于ATCC（美国模式培养物集存库/American type culture collection），为发根农杆菌原始菌株（ wild strain），含有pRi15834农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（禾本科，豆科，烟草等），特别适合对紫杉醇，青蒿等药用植物毛状根的诱导。唯地生物开发的ATCC15834电转感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测，转化效率>10⁵ cfu/μg DNA。

常规操作方法

1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入0.01-1 μg质粒DNA（体积不大于6ul，好用试剂盒抽提，双蒸水溶解；转化效率较高，一次使用前好做预实验确定所加质粒的量），用手打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质?；旌衔锟焖僖频降缁鞅校巧媳?，空管保留待用。

3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯从冰中拿出，吸水纸吸干外表面水份，快速放入电转槽中，启动电击，电击完成快速插入冰中，加入1 ml无抗生素的TY，并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的平板上，倒置放于28℃培养箱培养72小时

●ATCC15834菌株质粒转化相关抗生素使用浓度：

常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

● YMB配方（1L）：

       Yeast extract            1g

       MgSO4·7H2O        0.2g

       K2HPO4                0.5g

       NaCl                     0.1g

       甘露醇                    10g

       补水到1L体积，*溶解后，调PH值到7.0，121度、20分钟高温灭菌

       若配制YMB固体培养基，则加入15g 琼脂粉。

● TY配方（1L）：

       Tryptone                5g

       Yeast extract          3g

       补水到1L体积，*溶解后，121度、20分钟高温灭菌

       配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌

       每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。

       若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。

注意事项

1. ATCC15834生长缓慢，转化质粒的ATCC15834菌涂布在含抗生素的平板上应生长72小时。

2. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

3. 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质?？上嘤跎僮钪沼糜谕堪宓木?。

4. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或最终用于涂板的菌量。