BJ5183-AD-1：                                                   100μl/支

pCAMBIA2301(control vector，10ng/μl):                10μl

保存条件(保质期)：                                     -80℃（6个月） 

基因型

endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Str^R) [pAdEasy-1 (Amp^R)] 

产品说明

BJ5183-AD-1是携带了腺病毒质粒pAdeasy-1的BJ5183菌株。BJ5183菌株是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株，是目前腺病毒系统常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变，赋予BJ5183细胞较强的重组能力，有利于转入的目的基因与腺病毒骨架质粒的重组。endA1（缺失核酸内切酶）的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。BJ5183-AD-1菌株细胞中已经提前转入了腺病毒质粒pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]，赋予该菌株氨苄抗性，在病毒质粒构建时，只需转入线性化的目的质粒即可，简化了实验步骤，提高了病毒质粒重组概率。Str^R 赋予BJ5183-AD-1菌株链霉素抗性。BJ5183-AD-1感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒(size:1163bp)检测转化效率>1×10⁵ cfu/μg DNA。

操作方法

1. BJ5183-AD-1感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒（含有目标基因并线性化），并用手打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。

3. BJ5183-AD-1菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后，可选择在其他大肠杆菌菌株中扩繁，纯化质粒。

4. BJ5183-AD-1感受态细胞对温度敏感，应储存在-80℃超低温冰箱，避免温度波动，温度波动会降低感受态转化效率。